HRM技術服務之突變檢測

基因突變是指由于DNA堿基對的置換、增添或缺失而引起的基因結構的變化。基因突變在生物界中是普遍存在的，它是生物變異的主要原因，是生物進化的主要因素。但大多數基因突變對生物體是有害的，如果發生基因突變，就有可能破壞這種協調關系。絕大多數的人類遺傳病如人的色肓、糖尿病、白化病等遺傳病，都是突變性狀，是由基因突變造成的，這些病對人類健康構成了嚴重威脅。

目前突變研究手段比較

大致有三大類

    一類是以熒光共振能量傳遞為基礎的檢測方法，簡單的說就是以定量PCR為基礎的，比如Taqman探針法、分子信標（Molecular beacon）和FRET（HybProbe），應用這一類方法時需要對突變位點背景很清楚，針對特定的突變位點設計并合成序列/位點特異性探針。

    第二類是以分子雜交技術為基礎的檢測方法，如寡核苷酸連接分析（OLA）和動態等位基因特異性雜交（DASH），這幾種方法也均涉及到序列特異性探針。

    第三類是基于PCR技術與其它方法相結合的檢測方法，如變性-高效液相色譜（DHPLC）、SSCP（單鏈構象多態性）、DGGE（變性梯度凝膠電泳）、測序、Pyrosequencing和Ecotilling、芯片等技術，這幾種方法在PCR擴增的基礎上對產物過柱分析，或電泳分析，無需合成序列特異性探針，不受位點的局限，可對已知和未知突變進行操作。但DHPLC儀器昂貴，使用成本高，SSCP和DGGE通量相對較小、操作繁瑣、成本高、速度慢；測序是所有突變檢測的金標準，但測序的成本相當可觀；Pyrosequencing技術的突出優勢在于Pooling，適用于大規模的等位基因頻率分析，但需要特殊的儀器，硬件成本高；Ecotilling是一種在目標區段內篩查SNP的高通量、低成本的方法，但由于需要合成特定的紅外引物，所以在樣本量少、研究區段多的情況下就無法體現其優勢。

    為真公司創新使用基于羅氏LightCycler 480的基因突變-HRM檢測技術。其特點為：高通量、簡單、快速、省錢、高靈敏度；閉管檢測，避免污染造成的假陽性；靈敏度和精確度達到近100；HRM分析和PCR是在同時進行，減少了額外儀器，無疑成本更低，特異性和精確度更好。

    作為新一代的遺傳掃描工具，HRM具有“簡、效、快、廉”等其它技術難以比擬的優勢：
 簡：無需序列特異性探針，不受堿基位點局限，同時檢出已知或未知突變、SNP和甲基化位點；閉管操作，避免交叉污染。
 效：最低檢測0.1-0.01的突變或異常甲基化，檢測SNP靈敏度和特異性均為100。
 快：1次同時檢測不多于384個樣本，在60-90分鐘內完成檢測。
 廉：簡化操作步驟、降低人工和試劑成本，費用遠少于測序、Taqman探針等方法。

    HRM技術特別適用于樣本量多、檢測位點較少的SNP、突變或甲基化分析，是不同于基因芯片檢測方法（檢測位點多，樣本少）的高通量方法。同時，也是基因芯片篩選后的多個基因在更多標本中驗證的最佳方法。

突變-HRM檢測技術原理：

    在一定的溫度范圍內將PCR擴增的產物進行變性，期間實時檢測體系內熒光信號。熒光值隨著溫度變化，可繪制溶解曲線。每一段DNA都有其獨特的序列，因而也就有了獨特的熔解曲線形狀，如同DNA指紋圖譜一樣，具有很高的特異性、穩定性和重復性。根據曲線準確區分野生型和突變型基因。

 
HRM高分辨率熔解曲線示意圖
不同的基因型表現為不同的HRM熔解曲線形狀

我們的服務：

 免費的項目咨詢
 客戶提供樣本DNA的分離、純化（可有為真公司代為提取）
 根據客戶提供相關信息進行引物設計、方案設計
 處理DNA并運用HRM技術獲得特異溶解曲線
 結果分析，出具實驗報告，為臨床用藥提供依據

    蘇州為真生物在基因突變分析和研究方面積累了豐富的經驗，擁有開展突變研究的先進儀器設備，具有自己獨到的研究策略和方法，能有效挖掘資源，能為你高效快速的進行突變位點檢測。

服務熱線：13913580076

蘇州為真生物醫藥有限公司
Suzhou MicroDiag Biomedicine Co., Ltd.


蘇州為真生物醫藥有限公司（Suzhou MicroDiag Biomed Co., Ltd）/蘇州腫瘤分子診斷工程技術研究中心是一家擁有一支學科結構合理、掌握國際領先技術、富有創新精神的專業技術人才團隊的醫藥類高科技研發型企業，立足于開發自主知識產權的癌癥個體化醫療診斷試劑盒，致力于成為“個性化醫療時代” 的檢測專家！公司2008年9月注冊成立，資金1010萬，由國內著名風投機構中新創業投資有限公司投資，正進行千萬美元級別的I期融資。

公司坐落于國家級高新技術開發區——蘇州工業園（China-Singapore Suzhou Industrial Park）生物納米科技園（bioBay）。目前公司/中心已建立標準化實驗室、III類GMP標準分子診斷試劑盒生產車間和II類醫療器械生產廠房，總面積超過3000m2；現有高級研究員5名，歸國人員2名，博士8名，碩士十余名，員工均本科以上學歷；配備LightCyclerTM 480 PCR儀、Nano1000定量儀、Bio-Rad蛋白電泳儀、DAKO自動染色成像儀、BD FACSCalibur流式細胞儀等現代化分子實驗儀器。2010年4月中心/公司獲江蘇省藥監局頒發的III類分子診斷試劑盒和II類醫療器械生產許可證。

公司已獲批準“蘇州腫瘤分子診斷工程技術研究中心”，已申報建設“江蘇省腫瘤分子診斷工程技術研究中心”，公司是“蘇州市內資研發機構”， “江蘇省民營高科技企業”。近期，中心/公司作為核心成員參加由中國醫學科學院和蘇州工業園區聯合組建的“蘇州創新生物醫藥研究中心”，承擔其中“腫瘤分子診斷平臺”建設和運行。

蘇州為真以領先的癌癥檢測國際專利技術MiDTM為依托，正引領癌癥篩查和診斷全面進入“分子”時代。MiDTM突破了從腫瘤細胞死亡后DNA片段中檢測微量突變的關鍵技術，第一次實現了血清或血漿等非細胞體系的基因突變的高靈敏度集成式檢測，已形成三大系列檢測產品：“個性化用藥指導檢測試劑盒”、“早期癌癥篩查和診斷試劑盒”、“癌癥篩查套餐和預后、復發監控的產品”，形成國內最全面最專業的個性化醫療檢測方案，實現個性化用藥指導、健康篩查、超早期預警、早期診斷、預后指導和復發監控等。已獲5項國家發明專利，申請15項新發明專利，包括7項國際發明專利。2009年獲省部級課題經費達到128萬余元，2010年預計研究經費超過400萬左右。


為真人始終堅持“為真求實，開拓創新”的價值理念，以實現“更好的診斷(Better Diagnosis)，更好的健康(Better Health)”是自己不懈的使命。