最新的MS-HRM技術,相比BSP/MSP等方法,精度更高,成本更低。已在國外眾多知名雜志發表改技術文獻。蘇州為真----國內HRM技術唯一技術服務提供商!
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DNA甲基化——HRM檢測服務
DNA甲基化是發生在DNA堿基序列上的一種共價修飾。在哺乳動物中,DNA甲基化主要發生在5-CpG-3雙核苷酸序列的胞嘧啶上。在人類基因組中,大約有60~70的CpG胞嘧啶是甲基化的,其程度因不同的物種和細胞類型而異。DNA甲基化狀態在基因組中呈現出一定的分布模式,90%的甲基胞嘧啶位于重復序列上。DNA甲基化可以遺傳,并改變了DNA的結構特性與基因活動方式。
DNA甲基化意義:
靶序列上甲基基團的存在可以影響轉錄因子的結合,引起轉錄抑制,從而使該基因表達受到抑制。啟動子區CPG島的甲基化常常可以抑制該基因的轉錄,尤其是對于抑癌基因,凋亡相關基因,DNA修復基因等,啟動子區域發生甲基化會影響功能的發揮。不同的腫瘤組織基因甲基化狀態不一樣,可以作為早期檢測,監測腫瘤形成的重要標志物。對于某些特異基因的甲基化,更加重要,如DNA修復基因,可以引起對化療藥物的敏感,從而作為藥物治療療效的評價指標,指導臨床用藥。
檢測方法:
甲基化特異性PCR、Northern印跡法、Western印跡法、免疫細胞化學等,這些檢測方法需要花費大量時間,成本高,在臨床推廣應用時均存在一定的困難。
高分辨率熔解(High Resolution Melt,HRM)是一種最新的在表觀遺傳學中檢測 CpG 位點的一種新技術,主要是根據DNA序列的長度、GC含量、堿基互補性差異和特定飽和染料可以插入DNA雙鏈中的特性,應用高分辨率的熔解曲線對樣品進行分析,其分辨精度可以達到對單個堿基差異的區分。
DNA甲基化-HRM檢測原理:
甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析(MS-High Resolution Melting Curve Analyse)是一種不需要 PCR 產物后續操作的,簡單且靈敏的檢測基因甲基化水平的方法。該方法主要通過比較曲線的熔解溫度和峰形得以實現并且可以在一些列的 CpG 位點中檢測出單一的一個甲基化的發生,同時,也可以對一系列的 CpG 位點的甲基化水平進行分析。單個 CpG 位點的甲基化和平均的甲基化水平會對熔解曲線的形狀造成影響。采用重亞硫酸鹽處理 DNA 模板可以使 5-甲基胞嘧啶轉化為尿嘧啶。在PCR反應前,在非CpG島位置設計一對針對經亞硫酸氫鈉處理后DNA 鏈的引物,這對引物中間包含有意義的甲基化CpG島,一旦這些CpG島發生甲基化,使胞嘧啶(C)不發生變化,而與未甲基化的胞嘧啶(C)轉變成胸腺嘧啶(T),樣品中的 GC 含量發生了變化,最終被轉化成了熔解曲線 Tm 值之間的差異。 CpG 位點在小的擴增片段內的相對位置也會對熔解峰的形狀產生影響,因此,根據Tm值和熔解峰的形狀可以檢測出樣本的甲基化位點和甲基化程度。
HRM方法操作簡單、靈敏高、重復性高、成本低、不受檢測位點的局限高度等等優勢,將對于遺傳學、腫瘤學等方面的研究和臨床應用提供更大的幫助。
我們的服務:
l 免費的項目咨詢
l 客戶提供樣本DNA的分離、純化(可有為真公司代為提取)
l 根據客戶提供相關信息進行引物設計、方案設計
l 亞硫酸氫鈉處理DNA并運用HRM技術獲得特異溶解曲線
l 結果分析,出具實驗報告,為臨床用藥提供依據
我們的優勢:
蘇州為真生物在MS-HRM分析和研究方面積累了豐富的經驗,擁有開展MS-HRM研究的先進儀器設備,具有自己獨到的研究策略和方法,能為你高效快速的進行MS-HRM分析,找出有意義的CpG甲基化。