MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)

    實時熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Quantitative PCR）是在PCR反應(yīng)體系當(dāng)中加入熒光試劑，利用熒光信號積累實時檢測PCR的進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ唬�靈敏，快速，高重復(fù)地精確定量起始模板的濃度。
    康成生物將實時定量PCR技術(shù)與MeDIP技術(shù)完美結(jié)合。首先通過MeDIP技術(shù)富集甲基化的DNA片段，然后利用實時定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測，最后經(jīng)過數(shù)據(jù)分析處理得到檢測的生物樣品中特定位點(diǎn)的甲基化水平的精確數(shù)值。

MeDIP-qPCR技術(shù)特點(diǎn)
• 高特異性，針對感興趣的基因啟動子或CpG島設(shè)計實時定量PCR引物
• 超寬的線性范圍，可跨越7個數(shù)量級
• 精確度高，重復(fù)性好
• 靈敏度高

康成生物MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)流程
A. 將基因組DNA 超聲打斷成400bp-500bp片段
B. 加熱變性，并將變性后的單鏈DNA樣品分為兩份
C. 其中一份單鏈DNA樣品加入抗5’-甲基胞嘧啶抗體，另一份作為Total input DNA樣品
D. 使用親和層析分離C步樣品中的甲基化DNA片段的抗體復(fù)合物，樣品中其余的非甲基化DNA片段被洗脫。純化得到甲基化DNA片段（MeDNA-IP DNA）
E. 實時定量PCR檢測

實驗數(shù)據(jù)處理
•  Total input DNA樣品作為模板，用待測基因特異性引物進(jìn)行qPCR檢測得到Ct (input)
•  MeDNA-IP DNA樣品作為模板進(jìn)行檢測得到Ct (IP)
•  待測基因甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）的效率（MeDIP / Total input）可通過以下公式計算：
   %（MeDIP / Total input）= 2^[ Ct (input)- Ct (IP) ] X 100

康成客戶實例----MeDIP-qPCR
Quantitative detection of multiple gene promoter hypermethylation in tumor tissue, serum, and cerebrospinal fluid predicts prognosis of malignant gliomas. Neuro Oncol., 2010.
    研究人員利用MeDIP-qPCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，在不同惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤病人的腫瘤組織，血清和腦脊髓液樣本中，MGMT, p16INK4a, TIMP-3,和 THBS1四個基因啟動子區(qū)域都發(fā)生了高甲基化，而且血清和腦脊髓液的DNA甲基化水平與腫瘤組織基本一致（見下圖）。通過與臨床生存數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，MGMT, p16INK4a和THBS1的甲基化水平可以作為獨(dú)立的預(yù)測因子用于腫瘤的預(yù)后分析。因此血清或腦脊液中這些基因的甲基化有望成為新的腫瘤標(biāo)志物，同時檢測這些基因的甲基化水平也為惡性膠質(zhì)瘤病人的化療方案選擇和預(yù)后分析提供了新的理論依據(jù)。

上圖：MeDIP/Input值表示DNA甲基化水平的高低；圓圈代表不同的病人樣本；黑色短線是有效區(qū)分病人預(yù)后好和差的甲基化閾值。

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上海康成生物工程有限公司自2002年起專注于生物科研技術(shù)服務(wù)，是國內(nèi)最早一批專業(yè)提供生命科學(xué)前沿研究技術(shù)服務(wù)的高科技企業(yè)。為進(jìn)一步拓展在醫(yī)學(xué)科研服務(wù)領(lǐng)域業(yè)務(wù)的深度和廣度，向多譜領(lǐng)域發(fā)展，重塑品牌 Aksomics（數(shù)譜生物）。Aksomics全面整合公司在非編碼RNA（lncRNA、circRNA、small RNA等）、表觀遺傳學(xué)、蛋白組學(xué)等檢測方向的核心技術(shù)，依靠自身優(yōu)秀的研發(fā)、技術(shù)、營銷和服務(wù)團(tuán)隊，憑借國際領(lǐng)先的技術(shù)平臺和高標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控體系，形成了涵蓋表觀基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)等各個研究領(lǐng)域的一站式技術(shù)平臺。

【表觀基因組學(xué)】 DNA甲基化芯片、DNA羥甲基化芯片、染色質(zhì)免疫共沉淀芯片、DNA甲基化測序、DNA羥甲基化測序、染色質(zhì)免疫共沉淀測序、MeDIP-PCR、hMeDIP-PCR、ChIP-PCR等

【轉(zhuǎn)錄組學(xué)】LncRNA芯片、LncPath™芯片、環(huán)狀RNA芯片、T-UCR芯片、microRNA芯片、piRNA芯片、全基因組表達(dá)譜芯片、RNA測序、RNA m6A甲基化測序、small RNAs測序系列（microRNA測序、tRF&tiRNA測序、snoRNA測序、piRNA測序等）、LC-MS tRNA修飾檢測、 nrStar™ ncRNA PCR芯片（tRF&tiRNA，tRNA，snoRNA，F(xiàn)unctional LncRNA）、miRStar™癌癥特異性microRNA PCR芯片、NuRNATM mRNA PCR芯片、功能分類PCR芯片、LncRNA實時定量PCR、環(huán)狀RNA實時定量PCR、tRF&tiRNA實時定量PCR、microRNA實時定量PCR、mRNA實時定量PCR

【蛋白組學(xué)平臺】TMT標(biāo)記定量蛋白組學(xué)服務(wù)、Lable-free定量蛋白組學(xué)服務(wù)、磷酸化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、泛素化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、N-糖基化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、乙酰化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、蛋白-蛋白相互作用組學(xué)

【代謝組學(xué)】靶向代謝組學(xué)、非靶向代謝組學(xué)

【外泌體組學(xué)】外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)、外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)、外泌體代謝組學(xué)
康成生物為Agilent、Arraystar、Exiqon、Illumina、Qiagen、Thermo Fisher等國際知名品牌提供技術(shù)服務(wù)。康成客戶采用各類技術(shù)服務(wù)發(fā)表的SCI論文已超560篇。康成生物將持續(xù)聚焦生命科學(xué)發(fā)展的挑戰(zhàn)，提供有競爭力的產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價值。

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