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MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)
康成生物將實時定量PCR技術(shù)與MeDIP技術(shù)完美結(jié)合。通過MeDIP技術(shù)富集甲基化的DNA片段,利用實時定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測,經(jīng)過數(shù)據(jù)分析處理得到檢測的生物樣品中特定位點(diǎn)的甲基化水平的精確數(shù)值。
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:4614
最后更新:2018-11-26半年訪問:3
參考報價:免費(fèi)咨詢800-820-5058;400-886-5058
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MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)

    實時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time Quantitative PCR)是在PCR反應(yīng)體系當(dāng)中加入熒光試劑,利用熒光信號積累實時檢測PCR的進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠?qū)R唬`敏,快速,高重復(fù)地精確定量起始模板的濃度。
    康成生物將實時定量PCR技術(shù)與MeDIP技術(shù)完美結(jié)合。首先通過MeDIP技術(shù)富集甲基化的DNA片段,然后利用實時定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測,最后經(jīng)過數(shù)據(jù)分析處理得到檢測的生物樣品中特定位點(diǎn)的甲基化水平的精確數(shù)值。


MeDIP-qPCR技術(shù)特點(diǎn)
• 高特異性,針對感興趣的基因啟動子或CpG島設(shè)計實時定量PCR引物
• 超寬的線性范圍,可跨越7個數(shù)量級
• 精確度高,重復(fù)性好
• 靈敏度高


康成生物MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)流程
A. 將基因組DNA 超聲打斷成400bp-500bp片段
B. 加熱變性,并將變性后的單鏈DNA樣品分為兩份
C. 其中一份單鏈DNA樣品加入抗5’-甲基胞嘧啶抗體,另一份作為Total input DNA樣品
D. 使用親和層析分離C步樣品中的甲基化DNA片段的抗體復(fù)合物,樣品中其余的非甲基化DNA片段被洗脫。純化得到甲基化DNA片段(MeDNA-IP DNA)
E. 實時定量PCR檢測

實驗數(shù)據(jù)處理
•  Total input DNA樣品作為模板,用待測基因特異性引物進(jìn)行qPCR檢測得到Ct (input)
•  MeDNA-IP DNA樣品作為模板進(jìn)行檢測得到Ct (IP)
•  待測基因甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP)的效率(MeDIP / Total input)可通過以下公式計算:
   %(MeDIP / Total input)= 2^[ Ct (input)- Ct (IP) ] X 100

康成客戶實例----MeDIP-qPCR
Quantitative detection of multiple gene promoter hypermethylation in tumor tissue, serum, and cerebrospinal fluid predicts prognosis of malignant gliomas. Neuro Oncol., 2010.
    研究人員利用MeDIP-qPCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),在不同惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤病人的腫瘤組織,血清和腦脊髓液樣本中,MGMT, p16INK4a, TIMP-3,和 THBS1四個基因啟動子區(qū)域都發(fā)生了高甲基化,而且血清和腦脊髓液的DNA甲基化水平與腫瘤組織基本一致(見下圖)。通過與臨床生存數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),MGMT, p16INK4a和THBS1的甲基化水平可以作為獨(dú)立的預(yù)測因子用于腫瘤的預(yù)后分析。因此血清或腦脊液中這些基因的甲基化有望成為新的腫瘤標(biāo)志物,同時檢測這些基因的甲基化水平也為惡性膠質(zhì)瘤病人的化療方案選擇和預(yù)后分析提供了新的理論依據(jù)。

 


上圖:MeDIP/Input值表示DNA甲基化水平的高低;圓圈代表不同的病人樣本;黑色短線是有效區(qū)分病人預(yù)后好和差的甲基化閾值。

 

 

 

上海康成生物工程有限公司
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