服務介紹
通過流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。
將Annexin V 進行熒光素標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。
服務流程
1、細胞固定
2、配置染色液
3、細胞染色
4、上機檢測
5、結果分析
客戶提供
培養好的細胞(大于106)。
交付內容
實驗報告:詳細操作步驟、流式上機圖片及統計分析結果。
服務列表
項目 | 說明 | 周期 |
細胞周期流式檢測 | PI染色 | 5個工作日 |
細胞凋亡流式檢測 | Annexin V與PI標記 | 5個工作日 |
CCK-8檢測
Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒基于2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽試劑,可對細胞增殖和細胞毒性進行快速高度靈敏的檢測。
2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽是一種類似于MTT的化合物,其在電子耦合試劑1-Methoxy-PMS存在的情況下,可以被活細胞線粒體內的脫氫酶還原生成橙黃色水溶性的Formazan。然后用酶標儀在450 nm波長附近(430~490nm)測定光吸收值,可反映活細胞的數量和代謝活力,并由此反映細胞的存活、增殖、生長和毒性等狀態。例如加入細胞生長因子后,增殖生長旺盛的細胞能夠還原生成更多的Formazan,并具有較高的光吸收度;反之,抗增殖抗腫瘤或細胞毒藥物處理后,細胞生長變慢或毒性變大,光吸收度下降。而對于同種類型的細胞而言,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。與傳統的MTT或其他類似的方法相比,本試劑盒生成的Formazan是水溶性的,而且更加穩定,其檢測的線性范圍更寬、靈敏度也更高。
Tunel細胞凋亡檢測
顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品,經過生物素標記和后續的DAB顯色等步驟,即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。
細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP),隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結合,最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞,這就是本試劑盒通過TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。
本試劑盒有如下優點 (1)高靈敏度:可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。(2)特異性好:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。(3)快速:僅需約2-3個小時即可完成。(4)應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區分開,另一方面也不會把射線等誘導發生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
極少數細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發現TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,最好同時檢測多個凋亡指標。
本試劑盒足夠檢測20個樣品。