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CAR-T細胞治療技術(shù)之CAR分子構(gòu)建與慢病毒包裝的常見問題與解答

瀏覽次數(shù):1029 發(fā)布日期:2022-11-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負


CAR-T細胞療法是一種新興的腫瘤免疫治療方法,對比傳統(tǒng)的手術(shù)方法具有著自身不可替代的優(yōu)勢和發(fā)展?jié)摿Α?strong>在CAR-T技術(shù)的實施中,CAR分子構(gòu)建和慢病毒包裝是非常重要的。盡管近些年來,CAR分子設(shè)計和細胞功能的改進有了明顯提高,慢病毒載體的研究也有了很大進展,但距離在臨床上穩(wěn)定應(yīng)用還有很長的路要走。

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Q1:設(shè)計CAR分子時候?qū)θ绾魏Y選合適的抗體scFv序列?
Answer
選擇用于構(gòu)建CAR-T細胞的抗體有兩個很重要的指標(biāo):抗體的特異性和親和力。特異性決定了所構(gòu)建CAR-T細胞用于治療的安全性,親和力決定了CAR-T細胞的功能。CAR-T細胞構(gòu)建對所用抗體的親和力要求并不是越高越好,這一點上不同于抗體藥物,而是要有個適當(dāng)?shù)姆秶赃@一點就需要大量的實驗來篩選出親和力適當(dāng)?shù)目贵wscFv序列。

Q2:CAR-T、CAR-NK以及CAR-Macrophage中使用的CAR分子結(jié)構(gòu)上是否有差異?
Answer
用于構(gòu)建CAR-T的CAR分子一般情況下也適合于構(gòu)建CAR-NK和CAR-M。但是,目前也有不少針對于NK細胞設(shè)計的CAR分子,其主要在共刺激信號分子的使用上不同于CAR-T細胞的CAR分子,例如其使用DAP10和DAP12作為共刺激信號;對于巨噬細胞的CAR分子,其結(jié)構(gòu)中不需要包含共刺激分子只含有CD3ζ信號分子,由于CD3ζ和巨噬細胞Fc受體信號分子的相似性,因此含CD3ζ信號分子的CAR-巨噬細胞也能有效的進行特異性的吞噬作用。

Q3:不引入標(biāo)簽的情況下,如何實現(xiàn)CAR-T細胞陽性率的檢測?
Answer
目前市面上有應(yīng)該標(biāo)記的靶蛋白,可以通過這些靶蛋白標(biāo)記CAR-T細胞結(jié)合流式法來實現(xiàn)CAR-T細胞陽性率的檢測;另外,如果有針對CAR蛋白scFv的抗抗體,也可以使用抗抗體來檢測。

Q4:CAR慢病毒的滴度需要達到多少才能用于CAR-T細胞構(gòu)建,除滴度這一指標(biāo)外,慢病毒還進行哪些指標(biāo)的檢測?
Answer
一般要求活性滴度要大于1×10^8Tu/ml,除滴度這一指標(biāo)外,一般會進行無菌、支原體以及內(nèi)毒素等常規(guī)檢測。

Q5:我們構(gòu)建的CAR-T細胞陽性率總是過低應(yīng)該如何解決?
Answer
一方面可以提高慢病毒的質(zhì)量,例如滴度純度等;另一方面,可以通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件等;再一方面可以通過優(yōu)化CAR分子的結(jié)構(gòu),因為CAR分子的結(jié)構(gòu)以及其穩(wěn)定性都是影響CAR-T細胞陽性率的重要因素。

發(fā)布者:賽業(yè)(蘇州)生物科技有限公司
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