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細(xì)胞傳代出現(xiàn)抱團(tuán)生長(zhǎng)的原因及相對(duì)應(yīng)解決方法

瀏覽次數(shù):3736 發(fā)布日期:2022-2-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

經(jīng)常會(huì)聽到小伙伴們問:

細(xì)胞傳代時(shí)候會(huì)大量抱團(tuán),不是單個(gè)細(xì)胞,是什么原因?是消化過度了還是消化不完全?

細(xì)胞消化不成單個(gè)細(xì)胞,出現(xiàn)抱團(tuán)現(xiàn)象,怎么處理?

細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng),這種狀態(tài)正常嗎?

細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng)且生長(zhǎng)緩慢?該怎么辦?

 

我們做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候經(jīng)常會(huì)碰到細(xì)胞抱團(tuán)的現(xiàn)象,有些時(shí)候細(xì)胞抱團(tuán)對(duì)我們下一步實(shí)驗(yàn)沒什么影響,但是當(dāng)影響實(shí)驗(yàn)的時(shí)候就簡(jiǎn)直抓狂。當(dāng)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成率、鋪單克隆以及電轉(zhuǎn)等,這時(shí)候細(xì)胞要是抱團(tuán)了,得到的結(jié)果基本上都是不可靠的,那么細(xì)胞為什么會(huì)抱團(tuán)呢?又該如何避免?接下來就一次性給小伙伴們講清楚吧!

 

細(xì)胞抱團(tuán)的原因可能有

1、消化時(shí)間控制不當(dāng)

  • 有些小伙伴們不管什么細(xì)胞都消化3分鐘左右,然后用手拍打培養(yǎng)瓶使細(xì)胞成片脫落,但有些細(xì)胞消化不完全,細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開,這個(gè)時(shí)候就拍打下來很容易造成細(xì)胞聚團(tuán);
  • 也不可消化過度,圓形的細(xì)胞容易聚堆,想要通過后面的步驟吹打分開是很難的!

 

正確做法:培養(yǎng)前充分了解細(xì)胞的特性,可向購買細(xì)胞的廠家咨詢,也可在網(wǎng)上查詢確定細(xì)胞的最佳消化時(shí)間。

 

2、傳代時(shí)操作不當(dāng)

  • 傳代時(shí)細(xì)胞吹打不均勻,沒有將細(xì)胞團(tuán)吹散;
  • 吹打太用力造成細(xì)胞死亡,細(xì)胞死亡釋放的DNA與其他細(xì)胞形成黏性的細(xì)胞團(tuán);
  • 細(xì)胞離心速度多大或者離心時(shí)間過長(zhǎng);
  • 細(xì)胞長(zhǎng)的太滿才進(jìn)行傳代操作。


正確做法:

  • 消化前加入適量緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗,清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì);
  • 消化后吹打時(shí)上下左右吹打約10次左右,注意控制力度;
  • 確定細(xì)胞正確的離心條件,嚴(yán)格按條件執(zhí)行;
  • 細(xì)胞匯合度在80%~90%即可傳代。

 

3、細(xì)胞狀態(tài)不好

細(xì)胞狀態(tài)不好以及發(fā)生老化也可能造成細(xì)胞抱團(tuán)。

 

正確做法:及時(shí)換液或者傳代,檢查培養(yǎng)體系是否適合細(xì)胞。

 

4、細(xì)胞接種不當(dāng)

細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶/皿時(shí)細(xì)胞分布不均勻,或者細(xì)胞接種密度過高。

 

正確做法:

  • 細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶后可按倒8字形狀搖勻(即∞);
  • 但對(duì)于像96孔板這種小型培養(yǎng)皿,需要在接種前把細(xì)胞混勻,接種后不可再搖,否則很容易全部聚集在孔板的中間。若已經(jīng)接種了發(fā)現(xiàn)不均勻,可用槍頭輕輕吹打混勻;
  • 接種前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),按照正確的接種密度接種。
發(fā)布者:賽業(yè)(蘇州)生物科技有限公司
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