基因治療是一項前沿的醫(yī)學技術，在多年的發(fā)展中，已經取得了許多重要的進展。然而，在現有的基因治療技術中，仍然存在一些挑戰(zhàn)和限制，例如短暫性的表達、免疫反應和安全性問題等。而AAV基因治療正是針對這些問題而發(fā)展的一種新興技術，它的出現有望重新定義基因療法的未來。

基因治療（Gene Therapy）是指將外源正常基因導入靶細胞，以糾正或補償缺陷和異常基因引起的疾病，從而達到治療疾病的目的。一直以來，傳統(tǒng)大/小分子藥物主要針對蛋白靶點發(fā)揮作用，這也使得其適應癥有限，特別對于基因因素占據主要發(fā)病原因的遺傳性疾病，無法有效發(fā)揮治療效果。而這類基因相關疾病的患病人群其實并不小，例如罕見病，全球患者已高達3.5個億，而80%的罕見病是單基因遺傳病。
 

表1 幾種治療方式的對比

對于這些基因性疾病，目前的治療方式有限，基本都是從改善癥狀的角度進行治療，即治標不治本，患者的病癥仍會不斷進展并嚴重影響生活質量，甚至最終導致死亡。在此背景下，基因治療應運而生，其可從根本病因上來治療疾病，雖然基因治療在20年前就有相關的臨床應用案例，但其真正得到廣泛研究和臨床試驗是從近幾年開始。

基因治療常用載體
基因載體，又稱基因逆送載體，是將外源目的基因（或治療性基因）導入宿主細胞進行表達，以研究基因功能或治療疾病的工具，主要應用于細胞與基因治療（Cell and Gene Therapy, CGT）、生物科研、生物制藥、轉基因食品等領域。

基因治療通常可分為在體基因治療和離體基因治療。其中，在體治療主要是將帶有治療基因的非病毒或病毒載體，如常用的腺相關病毒（Adeno-Associated Virus，AAV），直接遞送到患者體內；而離體治療則是在體外將治療基因導入患者的細胞（常使用慢病毒LV），擴增后回輸至患者體內。相比于離體治療，在體治療的方式對基因遞送工具——即載體的要求更高。
 

在體基因治療和離體基因治療^[1]

基因遞送工具的選擇是基因治療中關鍵的一環(huán)，藥物最終在人體發(fā)揮藥效，很大程度取決于穩(wěn)定、高效的遞送系統(tǒng)。目前，基因治療常用的載體包括病毒載體和非病毒載體，其中病毒載體由于其宿主范圍廣，作用時間長，在基因治療研究中應用越來越廣泛，可以進行編碼基因或非編碼基因的過表達、干擾、敲除和內源性激活等操作。
 

基因載體分類

目前病毒載體中，常用的是AAV、AD、RV和LV四種，其中AAV因其具有較好的組織特異性、低免疫原性及高安全性，是目前在體基因治療應用最廣泛的遞送載體。
 

表2 常用工具病毒特征對比病毒載體各類指標對比

腺相關病毒（AAV）
腺相關病毒（Adeno-Associated Virus）是一種無法自主復制、無包膜單鏈DNA病毒。具有以下幾種優(yōu)點：

安全性高：AAV病毒在人體繁殖的過程中不會導致疾病，且對人體產生的免疫反應較小，因此AAV基因治療的安全性更高。

表達時間長：AAV病毒攜帶的基因可以在人體細胞內表達數年，從而實現長期治療的目的。

應用范圍廣：AAV基因治療可以用于改善和治療多種不同類型的遺傳性疾病。

目前，基因治療臨床試驗采用的主要為重組腺相關病毒載體（rAAv）。它由非致病的野生型AAV基礎上改造而成，只保留了兩個反向末端重復序列（ITRs）將原基因組替換為目的基因，最大化攜帶目的基因的容量，并降低其免疫原性和細胞毒性。
 

野生型與重組型AAV基因組結構示意圖^[2]

純化后的AAV病毒載體可以用于感染細胞，感染細胞時，AAV衣殼蛋白與細胞表面特異性受體結合，激活胞內信號通路，進而觸發(fā)AAV通過受體介導的內吞作用進入細胞，在核內體、高爾基體等細胞器的協(xié)助下進入細胞核，而衣殼蛋白會被蛋白酶體降解。

AAV病毒載體一旦進入細胞核，就會脫殼并釋放其單鏈基因組，并將其轉化為雙鏈DNA模板，在雙鏈DNA模板上進行轉基因的轉錄和翻譯，從而實現目的基因的表達。

AAV載體轉錄過程
（圖片來源：Uresearch：全球CGT基因載體行業(yè)市場研究報告（2022-2026））
 

AAV感染宿主細胞過程^[3]

不同血消型的AAV具有不同的組織靶向特異性，目前已發(fā)現AAV有13種亞型近200多種變型，并逐步用于基因藥物研發(fā)。AAV進入細胞的過程依賴于細胞表面糖基化受體識別AAV衣殼蛋白，因此AAV衣殼蛋白決定了其組織靶向的特異性。通過修飾、突變AAV的衣殼蛋白序列產生新的組織傾向性的AAV血清型，目前已發(fā)現AAV有13種天然血清亞型（AAV1-13），近200多種變型，每一種具有不同的組織趨向性，可靶向不同的組織。目前臨床常用的有AAV2、AAV5、AAV8和AAV9等。
 

表3 不同血清型AAV的組織靶向特異性

AAV基因治療前景
近年來，AAV基因治療在臨床和研究上取得了顯著的進展，包括應用領域不斷拓展、治療效果的不斷提升、治療方案的不斷創(chuàng)新等方面，被認為是基因治療發(fā)展的重要方向之一。

從臨床試驗來看，以AAV為載體的基因治療主要靶向眼部、大腦、肌肉和肝臟。一些研究表明，AAV基因治療可以有效地治療一些常見的遺傳性疾病，同時AAV基因治療在肝病、視網膜疾病、免疫療法等領域也有著廣泛的應用。它有望為治療一些目前無法治愈的遺傳性疾病帶來新的希望。隨著技術的不斷創(chuàng)新和進步，相信AAV基因治療將能夠在未來重新定義基因療法的未來。