經(jīng)常會(huì)聽(tīng)到小伙伴們問(wèn)：

細(xì)胞傳代時(shí)候會(huì)大量抱團(tuán)，不是單個(gè)細(xì)胞，是什么原因?是消化過(guò)度了還是消化不完全?

細(xì)胞消化不成單個(gè)細(xì)胞，出現(xiàn)抱團(tuán)現(xiàn)象，怎么處理？

細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)，這種狀態(tài)正常嗎？

細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng)且生長(zhǎng)緩慢？該怎么辦？

我們做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候經(jīng)常會(huì)碰到細(xì)胞抱團(tuán)的現(xiàn)象，有些時(shí)候細(xì)胞抱團(tuán)對(duì)我們下一步實(shí)驗(yàn)沒(méi)什么影響，但是當(dāng)影響實(shí)驗(yàn)的時(shí)候就簡(jiǎn)直抓狂。當(dāng)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成率、鋪單克隆以及電轉(zhuǎn)等，這時(shí)候細(xì)胞要是抱團(tuán)了，得到的結(jié)果基本上都是不可靠的，那么細(xì)胞為什么會(huì)抱團(tuán)呢？又該如何避免？接下來(lái)就一次性給小伙伴們講清楚吧！

細(xì)胞抱團(tuán)的原因可能有：

1、消化時(shí)間控制不當(dāng)

• 有些小伙伴們不管什么細(xì)胞都消化3分鐘左右，然后用手拍打培養(yǎng)瓶使細(xì)胞成片脫落，但有些細(xì)胞消化不完全，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒(méi)有分開(kāi)，這個(gè)時(shí)候就拍打下來(lái)很容易造成細(xì)胞聚團(tuán)；
• 也不可消化過(guò)度，圓形的細(xì)胞容易聚堆，想要通過(guò)后面的步驟吹打分開(kāi)是很難的！

正確做法：培養(yǎng)前充分了解細(xì)胞的特性，可向購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞的廠(chǎng)家咨詢(xún)，也可在網(wǎng)上查詢(xún)確定細(xì)胞的最佳消化時(shí)間。

2、傳代時(shí)操作不當(dāng)

• 傳代時(shí)細(xì)胞吹打不均勻，沒(méi)有將細(xì)胞團(tuán)吹散；
• 吹打太用力造成細(xì)胞死亡，細(xì)胞死亡釋放的DNA與其他細(xì)胞形成黏性的細(xì)胞團(tuán)；
• 細(xì)胞離心速度多大或者離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；
• 細(xì)胞長(zhǎng)的太滿(mǎn)才進(jìn)行傳代操作。

正確做法：

• 消化前加入適量緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗，清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì)；
• 消化后吹打時(shí)上下左右吹打約10次左右，注意控制力度；
• 確定細(xì)胞正確的離心條件，嚴(yán)格按條件執(zhí)行；
• 細(xì)胞匯合度在80%~90%即可傳代。

3、細(xì)胞狀態(tài)不好

細(xì)胞狀態(tài)不好以及發(fā)生老化也可能造成細(xì)胞抱團(tuán)。

正確做法：及時(shí)換液或者傳代，檢查培養(yǎng)體系是否適合細(xì)胞。

4、細(xì)胞接種不當(dāng)

細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶/皿時(shí)細(xì)胞分布不均勻，或者細(xì)胞接種密度過(guò)高。

正確做法：

• 細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶后可按倒8字形狀搖勻（即∞）；
• 但對(duì)于像96孔板這種小型培養(yǎng)皿，需要在接種前把細(xì)胞混勻，接種后不可再搖，否則很容易全部聚集在孔板的中間。若已經(jīng)接種了發(fā)現(xiàn)不均勻，可用槍頭輕輕吹打混勻；
• 接種前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按照正確的接種密度接種。