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穩定同位素標記 SILAC 技術實驗流程簡介

瀏覽次數:9780 發布日期:2019-1-10  來源:輝駿生物
一、SILAC概述
         SILAC即細胞培養條件下穩定同位素標記技術(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC),其基本原理是在細胞培養時,采用含有輕、中、重同位素型必需氨基酸的培養基進行細胞培養,用于SILAC主要的穩定同位素氨基酸是Lys和Arg, 細胞在傳代培養過程中同位素氨基酸將被細胞用于合成蛋白質,細胞經傳代培養5-6代后,細胞的所有蛋白質將被同位素標記,等量混合標記的蛋白質后經過SDS-PAGE分離和質譜分析,通過比較一級質譜圖中三個同位素型肽段的面積大小進行相對定量,同時二級譜圖對肽段進行序列測定從而鑒定蛋白質。

         由于SILAC標記技術是體內標記技術,幾乎不影響細胞的功能,同時靈敏度高,因此其在蛋白質組學相關領域中得到了廣泛的應用,如比較蛋白質組學,蛋白質與蛋白質相互作用,蛋白質與DNA相互作用,蛋白質與RNA相互作用等領域。
 
二、與體外標記技術相比,輝駿生物SILAC屬于體內標記,具有以下技術優勢
     1、高通量,可同時鑒定并定量數百至數千種蛋白質;
     2、定量精確,降低由于樣品制備不同而造成的實驗差異;
     3、線性定量范圍廣;
     4、靈敏度更高,蛋白質需要量明顯減少;
     5、標記采用的是體內標記技術,更接近樣品真實狀態。
 
三、輝駿生物SIALC技術服務流程
 
 
四、輝駿生物SILAC技術服務內容
    1、細胞同位素標記;
    2、樣本制備與定量;
    3、SDS-PAGE分離;
    4、胰酶酶切后液相分離和質譜分析;
    5、數據庫檢索;蛋白質定量分析;
    6、相關生物信息學分析;
    7、實驗報告提交。
 
五、送樣須知
    1、技術咨詢:在您開始實驗之前,本公司將為您竭誠提供最有效的SILAC實驗設計方案,本公司提供Lys和Arg均為L、M 、H標記的氨基酸。
    2、為了保證SILAC實驗能順利進行,樣品寄送需滿足以下要求:
   基本要求:SILAC實驗僅適用于能在SILAC培養基中培養的材料,具體情形請咨詢本公司。
   運輸要求:液氮或干冰保存寄送,廣州本地客戶可上門收樣。
   注:樣本應避免各類污染和反復凍融。
 
六、輝駿生物實驗報告內容
    1、蛋白質鑒定SILAC定量分析結果;
    2、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖;
    3、SILAC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數等。
 
七、輝駿生物質量承諾
    1、嚴謹的SILAC實驗設計方案確保定量分析結果可靠;
    2、提供客觀的SILAC實驗分析結果。
發布者:廣州輝駿生物科技股份有限公司
聯系電話:4006991663
E-mail:service@fitgene.com

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