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DAPI 簡易細胞核形態染色試劑盒產品說明書(中文版)

瀏覽次數:4798 發布日期:2017-10-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

 DAPI 簡易細胞核形態染色試劑盒產品說明書(中文版)

主要用途

DAPI 簡易細胞核形態染色試劑是一種旨在通過使用熒光染料 DAPI 與細胞核 DNA 特異性結合,并發出熒光檢測信號,用于分析和觀察細胞核形態或 DNA 含量以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞核(動物、人體、植物、昆蟲等)的觀察。產品即到即用,性能穩定,熒光清晰。

技術背景

作為細胞 DNA 染色劑之一的 4,6-二咪基-4-聯苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole;DAPI)特異性地與 DNA 雙螺旋的凹槽部分發生相互作用,從而與 DNA 的雙鏈緊密結合。結合后產生的熒光基團的吸收峰是 358nm 而散射峰是 461nm,正好是 UV(紫外光)的激發波長 356nm,使得 DAPI 成為一種常用的熒光檢測信號,并作為雙重染色或重疊染色的主要染色劑之一。

產品內容

 染色液(Reagent A)

毫升

產品說明書

1 份

保存方式

 

保存 在-20℃冰箱里,避免光照;有效保證 6 月

 

用戶自備

 

磷酸緩沖液(YJ12033.1):用于清洗樣品

 

微型臺式離心機:用于懸浮細胞的操作

 

蓋玻片:用于染色后封片

 

熒光顯微鏡:用于觀察細胞核 DNA 染色

 

實驗步驟

 

一、 貼壁細胞染色

1. 準備 1 個細胞培養 48 孔板的待測細胞,每孔鋪滿率達 70%

(注意:可以使用載玻片,載玻片培養皿,35mm 培養皿,和其它培養孔板,見注意事項 6

2. 進行染色前清理、固著、通透等步驟

3. 小心抽掉預處理液體,空氣中晾干

(注意:由此步驟開始,用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色

4. 小心加入 xx 微升  染色液(Reagent A,覆蓋培養孔表面

5. 室溫下孵育 10 分鐘,避免光照

6. 小心抽掉  染色液(Reagent A

7. 小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),覆蓋培養孔表面

8. 即刻在倒置熒光顯微鏡下進行觀察:激發波長 350nm,散發波長 460nm(細胞核呈現藍色)

二、 懸浮細胞染色

1. 將懸浮細胞(1 X 106細胞)移入到 1.5 毫升離心管

2. 放進微型臺式離心機離心 10 分鐘,速度為 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

3. 小心抽掉上清液

4. 進行染色前清理、固著、通透等步驟

5. 放進微型臺式離心機離心 10 分鐘,速度為 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

 

6. 小心抽掉預處理液體

(注意:由此步驟開始,用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色

7. 小心加入 xx 微升  染色液(Reagent A,混勻細胞顆粒群

8. 室溫下孵育 10 分鐘,避免光照

9. 放進微型臺式離心機離心 10 分鐘,速度為 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

10.小心抽掉 xx 微升  染色液(Reagent A

11.小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),混勻細胞顆粒群

12.放進微型臺式離心機離心 10 分鐘,速度為 300g(或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

13.小心抽掉上清液

14.小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),混勻細胞顆粒群

15.移出 xx 微升到載玻片上,放上蓋玻片

16.即刻在熒光顯微鏡下進行觀察:激發波長 350nm,散發波長 460nm(細胞核呈現藍色)

三、 載玻片染色

1. 準備 1 個細胞載玻片

2. 進行染色前清理、固著、通透等步驟

(注意:由此步驟開始,用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色

3. 小心加上 xx 微升  染色液(Reagent A,覆蓋載玻片表面

4. 室溫下孵育 10 分鐘,避免光照

5. 小心抽掉 xx 微升  染色液(Reagent A

6. 小心加上 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),覆蓋載玻片表面

7. 小心抽掉清理液

8. 蓋上蓋玻片

9. 即刻在熒光顯微鏡下進行觀察:激發波長 350nm,散發波長 460nm(細胞核呈現藍色)

 

注意事項

1. 本產品為 100 次操作

2. 本產品友好使用于雙重染色或重疊染色

3.  染色液(Reagent A為半通透性染料

4. 操作時須戴手套

5. 操作時,避免污染母液

6. 本產品適合各種規格的培養細胞:載玻片,載玻片培養皿,35mm 培養皿,和各種培養孔板,須相應調整試劑溶液:

操作容器

試劑溶液規格

 

 

載玻片

100 微升

 

 

載玻片培養皿

100 微升

 

 

35mm 培養皿

500 微升

 

 

96 孔培養板

50 微升

 

 

48 孔培養板

100 微升

 

 

24 孔培養板

200 微升

 

 

12 孔培養板

400 微升

 

 

6 孔培養板

500 微升

 

 

25cm2細胞培養瓶

1 毫升

 

7. 本產品可用于懸浮細胞或細胞脫離處理后染色

8. 本公司提供系列簡易細胞核染色分析試劑產品

質量標準

1. 本產品經鑒定性能穩定
2. 本產品經鑒定熒光清晰

發布者:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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