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GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標記試劑盒產品說明書(中文版)

瀏覽次數:2656 發布日期:2017-9-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標記試劑盒產品說明書(中文版)

 

主要用途

YIJI GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標記試劑是一種旨在使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依賴性蛋白激酶A(protein kinase K),標記純化的目標融合蛋白,成為敏感探針的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種GST融合的重組蛋白。其應用于后續遠西方雜交(FAR WESTERN BLOT) 印跡實驗和印跡覆膜結合(BLOT OVERLAY BINDING)實驗等。產品即到即用,性能穩定,操作便捷,反應敏感,重復性好。

技術背景

谷胱甘肽-S-轉移酶(glutathione-S-transferase;GST)融合蛋白(fusion protein)的技術,廣泛應用于蛋白與蛋白之間相互作用的研究、抗體的制造和純化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切離部位和已知激酶磷酸化部位構成,使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依賴性蛋白激酶A(protein kinase K),標記純化的目標融合蛋白,作為敏感的探針,在遠西方雜交(FAR WESTERN BLOT) 印跡實驗或印跡覆膜結合(BLOT OVERLAY BINDING)實驗中,探測和分析結合蛋白或多肽結構域。GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標記是蛋白組學研究的常用工具。

產品內容

YIJI緩沖液(Reagent A)  毫升

YIJI標記液(Reagent B)       微升(用戶自備)

YIJI反應液(Reagent C)       微升

YIJI酶促液(Reagent D)  微升

產品說明書       1份

 

保存方式

保存在-20℃冰箱里;有效保證6月

用戶自備

32P]ATP 同位素:用于同位素標記

1.5毫升離心管:用于樣品反應操作和保存的容器

干式恒溫儀:用于標記孵育

液體閃爍計數器(liquid scintillation counter):用于同位素活性測定

實驗步驟

  • 準備好純化的GST融合蛋白
  • 移取xx微升YIJI緩沖液(Reagent A)到1.5毫升離心管
  • 加入2.5微升用戶自備的GST融合蛋白(總量為10微克)
  • 加入xx微升YIJI標記液(Reagent B)(注意:同位素總量為10毫居里/毫升;5000居里/毫摩爾)
  • 加入xx微升YIJI反應液(Reagent C)
  • 加入xx微升YIJI酶促液(Reagent D)
  • 槍頭上下抽吸混勻
  • 放進30℃干式恒溫儀孵育30分鐘
  • 放進-70℃保存或置于冰槽里備用
  • 或使用5至10微升(107CPM)標記蛋白繼續后續遠西方雜交(FAR WESTERN BLOT) 印跡實驗和印跡覆膜結合(BLOT OVERLAY BINDING)實驗等

注意事項

  • 本產品為20次操作
  • 本產品的標記效率可達60%以上
  • 操作時,須戴手套
  • 操作時,嚴格無菌
  • 同位素操作須嚴格遵守規章制度
  • 建議使用帶濾芯的槍頭進行操作
  • 同位素[γ32P]ATP(1居里=37GBq),建議使用ICN或AMERSHAM(安瑪西亞)公司
  • 由于[γ32P]同位素的半衰期短,建議使用新鮮同位素材料;且標記后即刻使用
  • 可以直接在GST融合蛋白樹脂上進行標記,然后常規洗脫或凝血酶(THROMBIN)切離純化;純化后進行同位素活性測定
  • 本公司提供系列同位素處理試劑產品

質量標準

  • 本產品經鑒定性能穩定
  • 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶
發布者:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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