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HOK細胞人口腔角質細胞使用說明

瀏覽次數:6693 發布日期:2017-8-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

HOK 細胞人口腔角質細胞

品 牌:美國 ATCC

細胞生長:HOK 細胞人口腔角質細胞貼壁生長

細胞形態:上皮細胞樣

細胞數量:5*10^5cells/ml 1ml

細胞傳代:1:2 傳代

細胞純度:93%

細胞活力:95%

(6) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

HOK 細胞人口腔角質細胞增殖能力取決于細胞取材、培養技術、培養條件等綜合因素。請按照正確的培養

方法來解凍、傳代,以此保證細胞具備良好的增殖能力,方便您的后繼研究順利進行,

貨號 規格 培養基 運輸 保存

YJ1658 1ml/株 89%基礎培養基+10%FBS+1%雙抗 復蘇運輸 液氮保存

質量控制: 本細胞經過了檢測,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。

培養條件:37℃,5% CO2,PH 值7.2~7.4,無菌恒溫培養。

用途: 本產品只提供給進一步的科研使用,不可應用于治療等其他方面。

細胞相關操作(注意:細胞操作都需嚴格按照無菌操作)

收到復蘇好的貼壁細胞的處理方法:

1. 先從外包裝盒拿出細胞瓶,在細胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;

2. 在顯微鏡下觀察細胞狀態,并確定是否染菌,如有染菌,請立即拍照,并將細胞丟掉;

3. 將培養瓶置于 37°C,5% CO2 的無菌培養箱中培養 4-6 小時;

4. 倒掉多余的培養基,留正常體積的培養基;

5. 重新將培養瓶置于 37°C,5% CO2 的無菌培養箱中培養過夜

6. 第二天傳代。

收到凍存細胞的處理方法:

1.37°C 水浴預熱培養基;

2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C 水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);

3.在超凈臺中加入5ml 培養基重懸細胞,1000rpm 離心5min;

4.棄上清,加入5ml 培養基重懸細胞后轉入 T25培養瓶中,輕輕晃勻;

5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);

6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。

細胞傳代

1.當細胞融合度達到90%以上時,給細胞傳代;

2.37°C 水浴預熱培養基;

3.在超凈臺中,棄培養基,加入2-5mlPBS 清洗細胞后,再加入1ml 胰酶消化細胞;

4.顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,加入5ml 培養基終止消化;

5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打將細胞吹散;

6.將細胞移入離心管中,1000rpm 離心5min;

 

7.棄上清,加入15-20ml 的培養基重懸細胞后轉入 T75培養瓶中或按適當比例傳到 T25瓶中(確保細胞貼壁

后融合度在25-50%之間),細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細胞懸液,確保均

勻分布;

8.將培養瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養箱中培養。

細胞凍存

1.37°C 水浴預熱培養基;

2.消化細胞后給細胞計數:

1)洗凈晾干血小板計數板和蓋玻片,將蓋玻片完全覆蓋計數區;

2)充分混勻細胞,取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合,移液器吹吸混合均勻,用移液

器取20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞,以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;

3)顯微鏡下,數四個計數區的總細胞數,無活性細胞染成藍色,活細胞不被染色;

4)細胞密度=細胞總數/4×10000×2;

這里10000是不變的,因為計數的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm 即10-4cm3計數池內,1cm3=1ml,將

四個計數區的細胞數除以4取平均數,乘2是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。

5)細胞活性=活細胞數/細胞總數×100%。

注:細胞密度高時,可調整細胞懸液和臺盼藍的比例,計數時乘以相應的稀釋倍數即可。

3.當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,可以凍存細胞。

4.在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm 離心5min。

5.棄上清,用90%培養液+10%DMSO 的混合液重懸細胞,并調整細胞密度為1-3×106/ml。

6.將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

7.將裝有細胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,-20°C 放1-2h 后,-80°C 過夜,然后快速轉移到液氮中。

發布者:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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