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通用型HRP-AEC底物顯色試劑盒使用說(shuō)明

瀏覽次數(shù):3626 發(fā)布日期:2017-8-2  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

 通用型HRP-AEC底物顯色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(中文版)

 

主要用途

通用型HRP-AEC底物顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化,底物3-氨基-9-乙基咔唑氧化形成紅色不溶性產(chǎn)物,以此鑒定過氧化物酶活性,進(jìn)而確定目標(biāo)分子表達(dá)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。其適用于辣根過氧化酶標(biāo)記蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)包括蛋白質(zhì)西方雜交和免疫化學(xué),以及原位雜交染色等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作便捷,敏感度高,顯色清晰,重復(fù)性好。

技術(shù)背景

3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole;AEC)是過氧化物酶(Peroxidase)的生色底物,其分子式為C14H14N2,分子量為210.3。在過氧化物酶的催化下,電子供體AEC底物在過氧化氫氧化下,失去電子而呈現(xiàn)出顏色變化和沉積,形成穩(wěn)定性紅色不溶性產(chǎn)物,但溶解于有機(jī)溶劑中。被用于檢測(cè)過氧化物酶的活性,靈敏度高,特異性好。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液(Reagent A)  5毫升

稀釋液(Reagent B) 90毫升

反應(yīng)液(Reagent C)     5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書      1份

 

保存方式

保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent A),避免光照;有效保證6月

 

用戶自備

無(wú)離子水:用于清洗樣品

PBS緩沖溶液:用于清洗樣品

蘇木素復(fù)染試劑盒(80067.2):用于常規(guī)染色后復(fù)染

15毫升錐形離心管:用于染色工作液配制的容器

平式搖蕩儀:用于孵育和混勻反應(yīng)

2.2毫升離心管:用于染色工作液配制的容器

光學(xué)顯微鏡:用于染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

  • 免疫印跡染色

實(shí)驗(yàn)開始前,移取500微升染色液(Reagent A)到15毫升錐形離心管,加入9毫升稀釋液(Reagent B),混勻后,加入500微升反應(yīng)液(Reagent C),混勻后,標(biāo)記為染色工作液,避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

  • 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的固相膜(5 X 8 cm2):包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟
  • 加入5毫升室溫預(yù)熱的染色工作液,鋪滿整個(gè)固相膜表面
  • 置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育5至10分鐘,或直至紅色沉淀出現(xiàn);避免光照
  • 用鑷子夾起固相膜,放進(jìn)無(wú)離子水里清洗
  • 空氣中晾干
  • 數(shù)碼相機(jī)拍照記錄

 

  • 免疫化學(xué)染色

實(shí)驗(yàn)開始前,移取100微升染色液(Reagent A)到2.2毫升離心管,加入1.8毫升稀釋液(Reagent B),混勻后,加入100微升反應(yīng)液(Reagent C),充分混勻,標(biāo)記為染色工作液,置于暗室。然后進(jìn)行下列操作:

  • 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的組織切片:包括固著、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟
  • 室溫下,小心加上100微升的染色工作液,鋪滿整個(gè)切片樣品表面
  • 室溫下孵育5至30分鐘,或直至樣本出現(xiàn)紅色
  • 小心移去切片上的染色工作液
  • 室溫下,小心將切片置入50毫升用戶自備的PBS緩沖溶液中浸泡5秒
  • 小心移去切片上的PBS緩沖溶液
  • (選擇步驟)進(jìn)行蘇木素復(fù)染(注意:建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒-80050
  • 放上蓋玻片或封片
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:陽(yáng)性呈現(xiàn)紅色

 

注意事項(xiàng)

  • 本產(chǎn)品為10次(10毫升/次)或1000次(100微升/次)操作
  • 可用于1000 cm2免疫印跡膜片:建議5毫升用于1張5 X 8 cm2膜片 
  • 可用于1000片1 cm X 1 cm大小的組織切片
  • 用戶可以根據(jù)需求,調(diào)整試劑用量
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 染色時(shí)間根據(jù)情況調(diào)整,不宜過長(zhǎng),以免造成過度顯色
  • 如果封閉欠佳,易造成背景顏色過深
  • 染色工作液新鮮配制,不宜超過1小時(shí);如果發(fā)現(xiàn)沉淀,不宜使用
  • 固相膜染色后數(shù)小時(shí)將會(huì)褪色,不能永久存在
  • 本產(chǎn)品只能用于辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的雜交和沉淀反應(yīng)
  • 染色后可用蘇木素復(fù)染,增強(qiáng)對(duì)比度;建議使用 MAYER’S蘇木素復(fù)染試劑盒-80067.2
  • 染色后不能使用乙醇等有機(jī)溶劑清洗
  • 本公司提供系列組化染色試劑

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰
發(fā)布者:上海一基實(shí)業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-60536261
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