通用型HRP-AEC底物顯色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

通用型HRP-AEC底物顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，底物3-氨基-9-乙基咔唑氧化形成紅色不溶性產(chǎn)物，以此鑒定過氧化物酶活性，進(jìn)而確定目標(biāo)分子表達(dá)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。其適用于辣根過氧化酶標(biāo)記蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)包括蛋白質(zhì)西方雜交和免疫化學(xué)，以及原位雜交染色等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

3-氨基-9-乙基咔唑（3-amino-9-ethylcarbazole；AEC）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，其分子式為C14H14N2，分子量為210.3。在過氧化物酶的催化下，電子供體AEC底物在過氧化氫氧化下，失去電子而呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成穩(wěn)定性紅色不溶性產(chǎn)物，但溶解于有機(jī)溶劑中。被用于檢測(cè)過氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液（Reagent A）  5毫升

稀釋液（Reagent B） 90毫升

反應(yīng)液（Reagent C）     5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書      1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent A），避免光照；有效保證6月

用戶自備

無(wú)離子水：用于清洗樣品

PBS緩沖溶液：用于清洗樣品

蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.2）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

15毫升錐形離心管：用于染色工作液配制的容器

平式搖蕩儀：用于孵育和混勻反應(yīng)

2.2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器

光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 免疫印跡染色

實(shí)驗(yàn)開始前，移取500微升染色液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，加入9毫升稀釋液（Reagent B），混勻后，加入500微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為染色工作液，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的固相膜（5 X 8 cm²）：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 加入5毫升室溫預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個(gè)固相膜表面
• 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育5至10分鐘，或直至紅色沉淀出現(xiàn)；避免光照
• 用鑷子夾起固相膜，放進(jìn)無(wú)離子水里清洗
• 空氣中晾干
• 數(shù)碼相機(jī)拍照記錄

• 免疫化學(xué)染色

實(shí)驗(yàn)開始前，移取100微升染色液（Reagent A）到2.2毫升離心管，加入1.8毫升稀釋液（Reagent B），混勻后，加入100微升反應(yīng)液（Reagent C），充分混勻，標(biāo)記為染色工作液，置于暗室。然后進(jìn)行下列操作：

• 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 室溫下，小心加上100微升的染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)紅色
• 小心移去切片上的染色工作液
• 室溫下，小心將切片置入50毫升用戶自備的PBS緩沖溶液中浸泡5秒
• 小心移去切片上的PBS緩沖溶液
• （選擇步驟）進(jìn)行蘇木素復(fù)染（注意：建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽(yáng)性呈現(xiàn)紅色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次（10毫升/次）或1000次（100微升/次）操作
• 可用于1000 cm²免疫印跡膜片：建議5毫升用于1張5 X 8 cm²膜片 
• 可用于1000片1 cm X 1 cm大小的組織切片
• 用戶可以根據(jù)需求，調(diào)整試劑用量
• 操作時(shí)，須戴手套
• 染色時(shí)間根據(jù)情況調(diào)整，不宜過長(zhǎng)，以免造成過度顯色
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 染色工作液新鮮配制，不宜超過1小時(shí)；如果發(fā)現(xiàn)沉淀，不宜使用
• 固相膜染色后數(shù)小時(shí)將會(huì)褪色，不能永久存在
• 本產(chǎn)品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的雜交和沉淀反應(yīng)
• 染色后可用蘇木素復(fù)染，增強(qiáng)對(duì)比度；建議使用 MAYER’S蘇木素復(fù)染試劑盒－80067.2
• 染色后不能使用乙醇等有機(jī)溶劑清洗
• 本公司提供系列組化染色試劑

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰