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實驗秘笈--最亮的細胞轉(zhuǎn)染怎么做?

瀏覽次數(shù):3475 發(fā)布日期:2017-3-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

 

導語

做轉(zhuǎn)染實驗時小編就抱著一個信念,就是要給細胞點“顏色”看(熒光),但你知道嗎?就這個簡單的實驗過程,小小的細胞卻有著大大的能量,實驗過程中帶陽離子的脂質(zhì)體充當著“搬運工”的角色將質(zhì)粒從胞外“抓”到胞內(nèi),而細胞為質(zhì)粒的復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯提供“場所和原材料”,自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題,總結(jié)下來主要有以下二個方面: 

➙ 細胞狀態(tài)差

➙ 轉(zhuǎn)染效率低

 

本著“不會解決實驗問題的技術(shù)員不是一個好技術(shù)員”的原則,下面小編就分享一下自己的經(jīng)驗。

 

 

Q1:轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)較差
 
 

A:分析:主要是鋪板和反應液配制的原因

⇒ 細胞狀態(tài)是整個實驗的關(guān)鍵,如果細胞狀態(tài)不好,則轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)當然就好不了

⇒ 鋪板:過多或不均勻,細胞長的太滿就會狀態(tài)較差

⇒ 脂質(zhì)體本身有毒性,如果脂質(zhì)體加入量太多,會導致細胞狀態(tài)較差,或者細胞死亡,建議在做正式實驗前,先做一下預實驗,摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。

 

 

Q2:轉(zhuǎn)染后熒光效率低
 
 

A:分析:主要是細胞原因和“搬運”過程中的問題

細胞狀態(tài)仍然是重中之重,如果有一段時間轉(zhuǎn)染效果很不理想,必須要換一批次細胞;

加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻,太用力會破壞混合液的結(jié)構(gòu),

質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值: 過高一部分質(zhì)粒不能進入細胞,過低“搬運工”太多,有毒性且浪費;

吸、打液體時注意槍頭內(nèi)液面高度,是否完全打出;

反應液配好后等待20min,質(zhì)粒才會被完全包裹;

反應液滴加加入細胞,使“脂質(zhì)體+質(zhì)粒”均勻分布;

質(zhì)粒反復凍融影響濃度,盡量減少凍融次數(shù);脂質(zhì)體 -20℃保存,用完應馬上放回;

必要時需要檢測一下質(zhì)粒的濃度是否準確;

 

 

經(jīng)驗就分享到這里,下面再分享最后一個小Tips
 
 

轉(zhuǎn)染需48h,可以提前知道轉(zhuǎn)染的效果嗎?

 

根據(jù)經(jīng)驗轉(zhuǎn)染24h時的熒光效果至少達到下圖水平那么基本上不用擔心了~
 

 你學會給細胞“上色”了嗎?歡迎提出更多的實驗問題,大家一起討論!

 

長按加關(guān)注

發(fā)布者:上海吉凱基因醫(yī)學科技股份有限公司
聯(lián)系電話:400-621-0302
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