實驗秘笈--最亮的細胞轉(zhuǎn)染怎么做？
做轉(zhuǎn)染實驗時小編就抱著一個信念，就是要給細胞點“顏色”看（熒光），但你知道嗎？就這個簡單的實驗過程，小小的細胞卻有著大大的能量，實驗過程中帶陽離子的脂質(zhì)體充當著“搬運工”的角色將質(zhì)粒從胞外“抓”到胞內(nèi)，而細胞為質(zhì)粒的復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯提供“場所和原材料”，自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題，總結(jié)下來主要有以下二個方面：
➙ 細胞狀態(tài)差
➙ 轉(zhuǎn)染效率低
本著“不會解決實驗問題的技術(shù)員不是一個好技術(shù)員”的原則，下面小編就分享一下自己的經(jīng)驗。
A：分析：主要是鋪板和反應液配制的原因
⇒ 細胞狀態(tài)是整個實驗的關(guān)鍵，如果細胞狀態(tài)不好，則轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)當然就好不了
⇒ 鋪板：過多或不均勻，細胞長的太滿就會狀態(tài)較差
⇒ 脂質(zhì)體本身有毒性，如果脂質(zhì)體加入量太多，會導致細胞狀態(tài)較差，或者細胞死亡，建議在做正式實驗前，先做一下預實驗，摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。
A：分析：主要是細胞原因和“搬運”過程中的問題
❶. 細胞狀態(tài)仍然是重中之重，如果有一段時間轉(zhuǎn)染效果很不理想，必須要換一批次細胞；
❷. 加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻，太用力會破壞混合液的結(jié)構(gòu)，
❸. 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值： 過高一部分質(zhì)粒不能進入細胞，過低“搬運工”太多，有毒性且浪費；
❹. 吸、打液體時注意槍頭內(nèi)液面高度，是否完全打出；
❺. 反應液配好后等待20min，質(zhì)粒才會被完全包裹；
❻. 反應液滴加加入細胞，使“脂質(zhì)體+質(zhì)粒”均勻分布；
❼. 質(zhì)粒反復凍融影響濃度，盡量減少凍融次數(shù)；脂質(zhì)體 -20℃保存，用完應馬上放回；
❽. 必要時需要檢測一下質(zhì)粒的濃度是否準確；
轉(zhuǎn)染需48h，可以提前知道轉(zhuǎn)染的效果嗎？
根據(jù)經(jīng)驗轉(zhuǎn)染24h時的熒光效果至少達到下圖水平那么基本上不用擔心了~
你學會給細胞“上色”了嗎？歡迎提出更多的實驗問題，大家一起討論！
長按加關(guān)注
