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MED64系統(tǒng)重要應用:視覺信號通路在Cacna1f基因突變大鼠模型中發(fā)生重組

瀏覽次數(shù):2605 發(fā)布日期:2013-5-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

儀器應用手冊Volume 6
MED64系統(tǒng)重要應用:視覺信號通路在Cacna1f基因突變大鼠模型中發(fā)生重組
Ye Tao, Tao Chen, Ji-jing Pang, ZuoMing Zhang等
單位:
臨床航空醫(yī)學系,第四軍醫(yī)大學,西安,中國;
唐都醫(yī)院,第四軍醫(yī)大學,西安,中國;
University of Florida College of Medicine, Gainesville, Florida
 
關鍵詞multielectrode array (多陣列電極系統(tǒng),MEA) system; MED64; 視網膜(Retina);先天性靜止性夜盲(CSNB);Cacna1f基因;鈣離子流通道
 
來自第四軍醫(yī)大學和美國佛羅里達大學醫(yī)學院的課題組,通過先進的電生理技術手段(多陣列電極系統(tǒng)),研究Cacna1f基因突變大鼠模型視網膜中的電信號傳遞特征,闡述了先天性靜止性夜盲(CSNB)癥的潛在病理學機理。
 
Cacna1f基因能夠編碼Cav1.4鈣離子通道的a1亞基,1f基因的變異能夠通過影響鈣離子通道的功能,引發(fā)細胞鈣離子流的異常,造成神經細胞內神經遞質的分泌異常,大大影響哺乳動物視覺信號的產生與傳輸。Cacna1f基因的這些突變與iCSNB癥(不完整的x連鎖先天性靜止夜盲癥)密切相關。是遺傳性的嚴重夜視損失,會嚴重影響患者的生存質量。關于iCSNB癥的研究已經非常廣泛,通過發(fā)生突變的大鼠模型,研究者進行了很多關于iCSNB癥的相關研究,但由于研究技術的限制,Cacna1f基因的變異對視網
膜神經節(jié)細胞動作電位信號的影響所知甚少。研究者利用來自日本Alpha MED公司MED64多陣列電極系統(tǒng)(MEA system),進行視網膜的研究。MED64系統(tǒng)能夠進行視網膜的研究。MED64系統(tǒng)能夠通過密集分布的64個微電極,持續(xù)收集視網膜細胞的神經動作電位,為研究者繪制出神經元電生理功能分布的地圖,從而為視網膜神經元內部的相互聯(lián)系提供有價值的線索。得益于MED64系統(tǒng)的整體性研究特點和非侵入性的優(yōu)勢,這一技術解決了體外信號記錄和體內記錄研究之間的空白,尤其是在離子通道相關的電生理研究中,有著巨大的應用潛力。
 
方法:
從自然發(fā)生的Cacna1f基因突變大鼠(CSNB大鼠)和野生型大鼠樣本分別提取的視網膜(Retina)組織,放置到MED64系統(tǒng)的培養(yǎng)槽內,細胞層接觸培養(yǎng)槽底部的電極陣列。光刺激對視網膜神經細胞(RCGs)引發(fā)的電信號通過多電極陣列系統(tǒng)(MED64)持續(xù)收集、記錄。在電刺激的實驗中,MED64系統(tǒng)通過陣列電極給予視網膜神經細胞(RCGs)脈沖刺激。通過MED64系統(tǒng)配置的灌流體系,能夠為檢測樣本提供靶藥物(特定化合物)注入。MED64系統(tǒng)的離線分析系統(tǒng)能夠幫助用戶對所獲取數(shù)據(jù)的分析整理。
 
結果:
成功的從野生型和Cacna1f基因突變大鼠(CSNB鼠)視網膜樣本中獲取了典型性電信號。CSNB大鼠鼠視網膜樣本中光刺激(light-induced)引發(fā)的a-wave幅度逐漸下降,同時b-wave消失。施加100uM的4-氨基-2-羥基苯甲酸(2-amino-4-phosphobutyric acid)并不會阻滯a-wave的產生。自發(fā)性電信號的增加和光誘發(fā)電信號頻率的降低反映了視網膜神經節(jié)細胞捕捉光信號能力和穩(wěn)定性的下降。此外,‘開啟’通道(ON PATHWAY)總是莫名的與視網膜神經節(jié)細胞沒有聯(lián)系,CSNB大鼠可能優(yōu)先會選擇‘關閉’通道(OFF pathway)進行信號的傳遞。在電誘發(fā)實驗中,對視網膜樣本實施電脈沖誘發(fā),CSNB大鼠樣本相比野生型大鼠樣本,RGCs的長延遲反應強度更加微弱。
 
結論:
使用MED64系統(tǒng)(multielectrode array system(MEA),多電極陣列系統(tǒng)),研究者發(fā)現(xiàn)了Cacna1f基因突變大鼠(CSNB大鼠)視網膜在光信號通路可塑性發(fā)生功能改變的證據(jù)。研究者發(fā)現(xiàn),在CSNB大鼠中會發(fā)生視網膜感光神經遞質的功能紊亂和感光功能的喪失,而后者有可能具有可逆性。
兩種不同規(guī)格MED64的電極。A.用于記錄大范圍內的場電位信號的電極;B.用于記錄自發(fā)spike和小區(qū)域神經細胞相互聯(lián)系的電極。
 
A 為野生型和CSNB型大鼠對于光誘發(fā)的a-waves圖;
B Wt和CSNB型大鼠光誘發(fā)的a-waves的幅度差異;
C Wt中存在的b-wave能夠為100uM的APB完全去除,washoff后能夠恢復;
原文參考:Visual Signal Pathway Reorganization in the Cacna1f Mutant Rat Model
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