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激光共聚焦顯微鏡之免疫熒光實驗詳細介紹及應用

瀏覽次數:1676 發布日期:2024-11-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

免疫熒光技術(Immunofluorescence)是一項基于免疫學、生物化學和顯微成像檢測的強大方法,下面對免疫熒光進行詳細介紹。

01 定義與原理

免疫熒光技術,又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。其基本原理是利用抗原抗體反應的高度特異性,將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。


02 直接免疫熒光和間接免疫熒光 

直接免疫熒光:直接免疫熒光的實驗步驟相對簡單。它只需要將特異熒光抗體直接滴加于待檢的標本上,然后熒光標記的抗體與抗原發生特異結合,使之呈現熒光。這種方法只需要一個標記步驟,因此實驗方案較短。

間接免疫熒光:間接免疫熒光則相對復雜。它需要使用兩個抗體,即一抗和熒光素標記的二抗。首先,將未標記的一抗加到已知抗原標本上,使抗原抗體充分結合。然后洗滌去除未結合的抗體,再加入熒光標記的二抗,二抗與一抗結合,從而間接地標記抗原。這種方法需要額外的操作步驟,特別是在多色實驗中,需要選擇適當的二抗,每個二抗需要靶向不同的物種并偶聯至不同染料。

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圖片改編自:徠卡官網

03 特點

· 特異性強:由于抗原抗體反應具有高度的特異性,因此免疫熒光技術能夠準確識別目標抗原或抗體。
· 敏感性高:熒光色素的標記使得抗原抗體復合物在熒光顯微鏡下易于觀察,從而提高了檢測的敏感性。
· 速度快:免疫熒光技術操作簡便,能夠在短時間內完成檢測。

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徠卡激光共聚焦拍攝免疫熒光處理的肝類器官

04 應用范圍

直接免疫熒光:常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。

間接免疫熒光:間接免疫熒光法在基礎生物學、臨床免疫學診斷、生物醫藥研究、遺傳學等多個領域都有著廣泛的應用,其中在基礎生物學領域可以通過細胞爬片、組織切片、石蠟切片等精確地在細胞或組織中定位和檢測特定的蛋白質。

SBC搭建的徠卡stellaris 5是超高分辨率的點掃描共聚焦顯微鏡,具有22mm均勻大視場,掃描最大分辨率8K,搭載Power HyD檢測器系列能提供更高的光子檢測效率。同時還配備了拼圖模塊,Z軸序列拍攝模塊,自動聚焦模塊,共定位分析模塊,光譜拆分模塊,高階3D處理模塊等可以滿足不同的科研需求。 

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徠卡stellaris 5超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺

SBC超高分辨顯微共聚焦成像平臺,一個基于模塊化設計的激光共聚焦平臺,集成多種功能,提供精確的三維成像,及準確的細胞結構及動態過程的成像,是尖端生物醫藥研究的理想伙伴。

發布者:上海生物芯片有限公司
聯系電話:400-100-2131
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