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Edman 降解法:蛋白質(zhì)和小肽的N-末端氨基酸序列測定技術(shù)

瀏覽次數(shù):1217 發(fā)布日期:2024-3-10  來源:百泰派克生物科技

Edman 降解法是一種用于確定小肽和蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸序列的方法。這種方法是基于周期性地移除肽鏈N-末端的氨基酸并檢測該氨基酸的身份。這個過程可以重復(fù)進(jìn)行,從而連續(xù)地確定多個氨基酸的順序。

Edman降解的大致步驟如下:

1.肽鍵選擇性標(biāo)記:

 

首先,樣品與Edman試劑(酚酞異硫氰酸)反應(yīng),這會特異性地與肽的N-末端氨基酸形成一個環(huán)狀酞酰化衍生物。

2.酞酰化衍生物的裂解:

 

經(jīng)過酞酰化后,酞酰化氨基酸可以通過溫和的酸性條件(如三氟醋酸)從肽鏈上釋放出來,而不破壞肽鏈上的其它氨基酸。

3.氨基酸檢測:

 

釋放的酞酰化氨基酸可以通過色譜法進(jìn)行分離和檢測,從而確定其身份。

4.重復(fù)過程:

 

剩余的肽再次與Edman試劑反應(yīng),釋放下一個N-末端的氨基酸,如此反復(fù)進(jìn)行。

圖1

雖然這個方法在確定小肽的序列上很有用,但它有一些局限性。其中最大的局限性是它在降解過程中會出現(xiàn)效率損失,這通常使得連續(xù)降解超過15-20個氨基酸變得困難。對于較大的蛋白質(zhì),通常需要將其分解為較小的片段,然后對這些片段進(jìn)行Edman降解。

近年來,由于質(zhì)譜技術(shù)的進(jìn)步,質(zhì)譜成為了蛋白質(zhì)序列和鑒定的主要工具,但在某些情境下,Edman降解仍然是一個有用的補充方法。

發(fā)布者:北京百泰派克生物科技有限公司
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