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AO/PI雙熒光染色技術操作使用指南

瀏覽次數:5502 發布日期:2022-9-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

臺盼藍染色作為活細胞計數的首 選方式,可將細胞膜不完整的死細胞染成藍黑色,通過在鏡下和未被染色的活細胞進行對比并計數,從而可快速了解細胞樣品的活率和濃度。但在實際使用過程中,臺盼藍染色計數會出現以下問題:

臺盼藍染色的特異性不強,常會將原代細胞的碎片、PBMCs中殘留的紅細胞計入總數;

臺盼藍細胞毒性較大,且染料配制濃度無統一標準,導致在進行多樣品計數時由于間隔時間過久而結果誤差較大。


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臺盼藍染色
 

而AO/PI染色法可解決這些問題。AO(Acridine Orange)又稱為吖啶橙,PI(Propidium Iodide)又稱為碘化丙錠,可分別將DNA染成綠色和紅色,而碎片和雜質或哺乳動物紅細胞由于沒有細胞核不會被染色,同時細胞毒性非常小,所以廣泛應用于原代細胞計數、細胞治療、生物制品等領域
 

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AO/PI雙熒光染色
 

多數情況下,市面上可以見到很多預配制的染液,細胞樣本在染液終濃度為2-25μg/mL時,孵育5–30分鐘,將可以發出明亮的核染色熒光。但是實際應用時,由于細胞類型、染色條件以及檢測儀器的參數不同,實際呈現的效果也不一樣。此時,只需按照下文中提供的染色方案即可獲得較為穩定的染色結果

AO/PI快速染色方法:

預先配置(50μg/mL PI, 10μg/mL AO)的染色預混液;

吸取 10μL 細胞樣本至 EP 管中,加入等體積的 AO/PI 預混染色液,吹打混勻后孵育 5min(終濃度 25μg/mL PI, 5μg/mL AO);

輕微吹打后,吸取 10μL 染色后的細胞上樣至細胞計數板中進行分析,推薦使用瑞沃德自動細胞計數儀C100/C100-Pro,可精準區分AO/PI雙熒光染色后的活死細胞,一鍵計數,精準快速。

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瑞沃德自動細胞計數儀C100/C100-Pro,除了可用于AO/PI熒光細胞計數,還可廣泛適用于細胞計數分析、細胞活力分析、細胞大小分析、檢測細胞的轉染效率(GFP、RFP)等多重應用場景分析,助你輕松分析細胞數量、活力、大小和熒光強度
 

瑞沃德自動細胞計數儀C100

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計數精準,保障實驗效果

智能便捷,快速上手

9秒快速計數,省時省力

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發布者:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
聯系電話:400-966-9516
E-mail:rwd@rwdls.com

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