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AOPI熒光染色法:細(xì)胞活率分析的標(biāo)準(zhǔn)化解決方案

瀏覽次數(shù):378 發(fā)布日期:2025-6-9  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
在生物制藥領(lǐng)域,細(xì)胞活率分析是評(píng)估產(chǎn)品安全性和有效性的關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo)。無(wú)論是抗體、疫苗生產(chǎn),還是細(xì)胞治療和基因治療產(chǎn)品,活細(xì)胞比例直接決定了生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和終產(chǎn)品的質(zhì)量。以CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品為例,活率低于標(biāo)準(zhǔn)要求的細(xì)胞產(chǎn)品不僅療效不足,還可能引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)。由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗(yàn)中心于2025年1月發(fā)布的《細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)檢查指南》中指出,CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品主要檢測(cè)項(xiàng)目包括熒光法檢測(cè)細(xì)胞活率及活細(xì)胞密度。本文將為大家分享高精度、標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞活率分析方法。

關(guān)于AOPI熒光染色法
AOPI熒光染色原理
AOPI試劑由AO(Acridine Orange,吖啶橙)和PI(Propidium iodide,碘化丙啶)組成。其中,AO是一種異染性熒光陽(yáng)離子染料,可滲透細(xì)胞膜,并嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,檢測(cè)到綠色熒光。PI不能通過(guò)完整的細(xì)胞膜,只能進(jìn)入死細(xì)胞的細(xì)胞膜,并嵌入死細(xì)胞的細(xì)胞核,檢測(cè)到紅色熒光。當(dāng)AO、PI試劑均存在于細(xì)胞中,在合適的染料配比下,染料間會(huì)發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,致活細(xì)胞被激發(fā)出綠色熒光,死細(xì)胞被激發(fā)出紅色熒光。
 

使用CytScop系列智能細(xì)胞計(jì)數(shù)儀經(jīng)AOPI染色后獲得的代表性細(xì)胞圖像


傳統(tǒng)操作步驟
AOPI熒光染色法是一種可靠的分析細(xì)胞活率的方法,但減少主觀因素影響,實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作才能獲得可靠性和一致性的結(jié)果。

AOPI熒光染色法標(biāo)準(zhǔn)化的基石:微流控+AI模型

CytScop®Pro智能細(xì)胞計(jì)數(shù)儀通過(guò)微流控芯片全自動(dòng)染色混勻、AI算法自動(dòng)識(shí)別分析樣品,無(wú)需手動(dòng)移液、染色、混勻、上樣、細(xì)胞活率分析等操作,實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞樣品活率分析,消除主觀因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。檢測(cè)完成一個(gè)樣品后,自動(dòng)清洗,確保樣品之間的檢測(cè)一致性,提高結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。

微流控芯片
自動(dòng)染色&混勻:AOPI染料集成于芯片流道,細(xì)胞懸液注入后自動(dòng)溶解混合,消除人工配液誤差;專利的微米級(jí)通道設(shè)計(jì)使得樣品混勻過(guò)程保持樣品的完整性;使得儀器液路系統(tǒng)更加精簡(jiǎn),用戶在日常操作中所需給設(shè)備清潔和維護(hù)工作量大幅降低。
雙熒光+明場(chǎng)大視野光學(xué)系統(tǒng)成像
CytScop的光學(xué)專利技術(shù)利用細(xì)胞與其周圍水介質(zhì)之間的微小折射率差異來(lái)增強(qiáng)細(xì)胞與其類似的透明溶液中產(chǎn)生高效的對(duì)比度。這種技術(shù)方法在明場(chǎng)模式下,能夠突出細(xì)胞的外觀形態(tài)和局部特征均能產(chǎn)生明顯的差異,具有非常好的立體感和極佳的細(xì)節(jié)表現(xiàn)能力。系統(tǒng)在暗場(chǎng)熒光下,系統(tǒng)能夠收集更多的熒光信號(hào),從而增強(qiáng)不同波長(zhǎng)的熒光特異性。
AI算法

CytScop®的AI模型能夠更科學(xué)地識(shí)別細(xì)胞凋亡/團(tuán)簇團(tuán)聚等復(fù)雜情況;模型運(yùn)行時(shí),不再需要人為設(shè)置各種參數(shù)閾值如直徑、亮度、圓度、系數(shù)等,對(duì)不同的細(xì)胞類型/生物工藝具有良好的可拓展性與更準(zhǔn)確的泛化能力,使得分析結(jié)果更加準(zhǔn)確。

綜上所述,基于AOPI熒光染色法并結(jié)合CytScop®細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的自動(dòng)化分析,為細(xì)胞治療產(chǎn)品的細(xì)胞活率分析提供了一個(gè)高精度、標(biāo)準(zhǔn)化的解決方案。通過(guò)完全自動(dòng)化操作生成的客觀、可量化、可追溯數(shù)據(jù),為GMP合規(guī)性提供了堅(jiān)實(shí)保障;其強(qiáng)大的細(xì)胞類型兼容性,使其能有效適應(yīng)不同來(lái)源、形態(tài)各異的復(fù)雜細(xì)胞樣本,覆蓋從中間過(guò)程控制及工藝評(píng)估等關(guān)鍵工藝步驟;同時(shí),微流控技術(shù)的創(chuàng)新應(yīng)用顯著降低的樣本消耗量,使其對(duì)自體細(xì)胞等珍貴的治療性細(xì)胞樣本尤為友好,為細(xì)胞產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)提供更加準(zhǔn)確、高效、便捷的細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析解決方案。

發(fā)布者:上?U嫔茖W(xué)有限公司
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