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流式細胞術FCM在染色體倍性分析上的優勢及實驗步驟介紹

瀏覽次數:10261 發布日期:2021-3-17  來源:廣州吉源生物科技有限公司

倍性育種,指通過改變染色體的數量,產生不同的變異個體,進而選擇優良變異個體培育新品種。正常的配子細胞中所包含的染色體數或半數的體細胞染色體數稱為一套單倍染色體,用符號n 表示。具有一個染色體組的細胞和由這樣的細胞組成的個體稱為單倍體(n) ,具有兩個染色體組的細胞或個體稱為二倍體(2n),具有兩個以上整套染色體組的細胞或個體則稱為多倍體,包括三倍體(3n)、四倍體(4n)等。

 

傳統的倍性鑒定主要采用常規壓片法統計染色體數目,但采用這種方法很難尋找到分裂中期染色體分散良好并可進行計數的細胞,而且整個過程耗時長,檢測效率低。采用流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)進行倍性分析的方法簡化了倍性分析的過程,可以快速準確檢測同一物種范圍內不同倍性的樣品。FCM作為一項快速、高效的檢測技術,被廣泛應用于細胞分類學、植物遺傳學及植物生理學等研究領域中。FCM常被用于鑒定植物倍性水平,通過檢測植株G0/G1峰的細胞核DNA含量可以判斷出植物的倍性。


 


實驗原理
首先需要裂解液將組織中細胞核釋放出來,并打開DNA鏈,然后用DAPI染液將細胞核DNA上的A-T
堿基對特異性染色,再用儀器檢測出被染色的A-T堿基對發出的熒光強度。比如二倍體的熒光強度是100(橫坐標),那么單倍體的熒光強度就是50(橫坐標)。縱坐標是細胞數量的顯示,通常來說,信號峰高說明信號比較好,雜質少。


倍性=待測樣本的峰值/參照物的峰值*參照物倍性
e.g. 100/50 x 2n = 4n

實驗儀器設備及方法
實驗步驟如下:




樣品準備
植物樣品準備:葉片的新鮮程度直接影響實驗結果。由于次生代謝產物的影響,會導致信號峰過寬,甚至檢測不到信號峰的情況。嫩葉的選擇要選取新鮮、完全舒展開、無蟲咬、無枯萎、分裂不活躍的部位實驗結果:
魚類樣品準備:大魚可以取血液樣本檢測,或者取魚組織檢測,切取0.5cm2大小的新鮮魚肉即可。
貝類樣品準備:貝類大樣本可以直接撬開貝殼,取貝的新鮮組織作為樣本。貝類幼苗需要收集剛孵化2-3天內的浮游狀態的幼苗。
 
吉源生物采用配置紫外激光的Sysmex-Partec CyFlow 倍性分析儀,搭配Sysmex CyStain DAPI倍性分析試劑盒,在2min內即可完成一個樣本的檢測,為您提供高效、準確的檢測結果,形成可靠數據,出具專業報告。

如有實驗服務需求,請聯系我司,我們將為您提供準確、可靠的實驗解決方案!
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