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在體多通道記錄技術(shù)的應(yīng)用及實驗流程講解

瀏覽次數(shù):2170 發(fā)布日期:2022-1-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
在體多通道記錄技術(shù)的應(yīng)用及實驗流程
 
大腦與神經(jīng)元
 

 
人類大腦由大約 100 億個神經(jīng)元組成,神經(jīng)元之間通過突觸相互連接成復(fù)雜的功能網(wǎng)絡(luò),因而大腦是人體最復(fù)雜的器官。目前,人們對大腦的功能機制的認(rèn)知還停留在較低的水平,研究大腦的功能也成為科學(xué)家的終極目標(biāo)。

2013 年 1 月,人腦工程成為歐盟「未來新興旗艦技術(shù)項目」之一,未來 10 年內(nèi)將獲得 10 億歐元的科研經(jīng)費。隨后,奧巴馬宣布將從 2014 財年的政府預(yù)算中拿出 1 億美元,啟動"人腦活動圖"項目研究(Brain Activity Map project)。這兩大腦科學(xué)研究計劃勢必將掀起神經(jīng)科學(xué)研究的熱潮。

神經(jīng)元,又稱神經(jīng)原或神經(jīng)細(xì)胞,是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和行使功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突起的細(xì)胞,它由細(xì)胞(Soma)和細(xì)胞突起-軸突(Axon)和樹突(dendrite)構(gòu)成。

神經(jīng)元與神經(jīng)元之間會發(fā)生頻繁的信號傳遞與交互,從而構(gòu)成非常復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。神經(jīng)元之間的信號傳遞依賴于細(xì)胞膜上的離子通道(Ion channel)。離子通道的開閉會引起膜內(nèi)外離子的交換,如 Na+/K+ 離子,從而引起膜電位的變化。

所以說神經(jīng)元的信號傳遞會伴隨著電活動,當(dāng)達到一定閾值時,便可引發(fā)動作電位(A c t i o n p o t e n t i a l)。檢測神經(jīng)元動作電位的發(fā)生變成為研究神經(jīng)活動的主要方法,比如傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)。
在體多通道記錄技術(shù)(in-­‐vivomultichannelrecording)
傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)是一種離體的記錄方法(in-vitro), 主要是針對離體培養(yǎng)的細(xì)胞和腦片進行記錄,而且大多是單通道記錄,一次只能記錄一個細(xì)胞,通量不高。隨后發(fā)展出了 MEA 技術(shù),即 Multi-ElectrodeArray,利用多電極陣列對細(xì)胞或腦片進行記錄,這樣就變成了多通道記錄,解決了通量的問題。

然而,離體狀態(tài)下的記錄與動物的本來狀態(tài)還是相去甚遠(yuǎn),尤其是研究動物在某種活動狀態(tài)下的神經(jīng)活動更加是不能實現(xiàn)。所以在體或活體狀態(tài)的多通道記錄便是迫切需要。

在體多通道記錄(in-vivo multichannel recording)是在活體狀態(tài)下研究動物神經(jīng)活動的一種方法。將電極陣列植入動物的大腦某皮層或區(qū)域,電極后續(xù)接入高靈敏度的放大器及記錄系統(tǒng),將記錄到的模擬信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號,在配套的記錄軟件上變可以觀察到放電信號。

在體多通道記錄的實驗流程

在體多通道記錄主要包括動物手術(shù)、電極植入、信號記錄采集及數(shù)據(jù)分析等步驟。
  1. 動物手術(shù):
 
以大小鼠為例,將實驗動物麻醉,常用戊巴比妥鈉或水合氯醛靜脈注射的方法,有條件也可使用氣體麻醉。去除動物頭頂處的毛,將動物固定在腦立體定位儀上,然后將頭皮剪開,將組織清理干凈,露出頭骨,可以比較清晰的看見骨縫。利用骨縫進行定位,確定電極植入的位置。用顱骨鉆在顱骨開天窗,一般方形的窗比較常用。小心取下骨片,再在天窗對側(cè)腦區(qū)打下幾個螺釘孔,用來固定顱骨螺釘,一般打 2 至 4 個。用 1 ml 注射器針頭小心去除硬腦膜,盡量避免出血。

(2)電極植入:

 
先固定顱骨螺釘,使得螺釘接觸到腦組織,但又不過分壓迫。用電極夾持器夾住電極,先定位在天窗上方,將電極的地線纏繞在顱骨螺釘上。講電極尖端緊挨腦組織表面。然后,用微推進器緩慢向下推進(建議使用高精度的電動微推進器),使得電極進入腦組織。注意推進的速度,使電極緩慢到達想要記錄的腦區(qū)。

(3)信號記錄:

連接好記錄系統(tǒng),包括CerePlex™系列微型數(shù)字放大器,主機,電腦等。打開記錄軟件,觀察放電信號。待觀察到穩(wěn)定且信噪比較高的信號,便可開始記錄。在記錄同時還可以同時接入其他外源事件和刺激,如電刺激、光刺激。

除了麻醉狀態(tài)下記錄,還可以讓動物清醒狀態(tài)下進行記錄。這樣便可結(jié)合動物行為學(xué),讓動物完成各種任務(wù)并同時進行記錄。

(4)信號分析:
記錄好數(shù)據(jù)之后,便可進行數(shù)據(jù)分析。
 
 
康森特生物科技(長沙)有限公司代理的在體多通道神經(jīng)電生理系統(tǒng)用于動物神經(jīng)生理學(xué)實驗的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),功能強大且操作簡便。可以滿足用戶的不同實驗需求,對頭部固定或清醒自由活動動物進行高通量、低噪聲的高質(zhì)量數(shù)據(jù)記錄。
 

 
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