細胞總乙�；�水平的快速測定方法 -------免疫親和色譜-ELISA方法

步驟一：親和色譜分離提純乙�；�蛋白

1.用細胞裂解液裂解細胞，10000rpm離心2分鐘，取上清備用。
2.取20-40 μL抗乙�；�賴氨酸抗體填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388)， 用PBS洗2次，每次1mL。
3.將細胞裂解上清液與洗好的填料（ICP0388）混勻，39oC旋轉搖床低速孵育60分鐘。
4.1000rpm離心1分鐘，去上清，用PBSt重懸沉淀，1000rpm離心1分鐘，去上清，重復3次，最后一次用PBS洗，吸棄上清。
注：細胞裂解液里應該含有蛋白酶抑制劑，組蛋白乙酰化酶抑制劑等。

步驟二：釋放及包被固定分離提純的乙酰化蛋白                                    
5.用20 μL0.1M HCL將步驟2的抗賴氨酸抗體填料-乙酰化蛋白復合物于沸水中煮2分鐘，10000rpm離心1分鐘，將上清液體全部轉移到含有80 μL的0.2M Na2CO3的ELISA薄板上，39oC孵育30分鐘；
6.取出ELISA薄板，拍干。用PBSt清洗2次，每次均需拍干。加入100 μL含0.5%BSA的PBSt ，39 ℃封閉10分鐘。


步驟三：用抗乙酰賴氨酸抗體HRP標記物檢測蛋白乙�；�水平

7.取出ELISA薄板，拍干，用PBSt清洗2次，拍干。加入100 μL濃度為0.25 μg/mL抗賴氨酸抗體HRP偶聯復合物（Anti-acetylated lysine HRP conugates,ICP0381），39 ℃孵育30分鐘。
8.取出ELISA薄板，拍干，用PBSt清洗板孔3次，每次均需拍干。加入100 μLTMB液，39 ℃孵育顯色10-20分鐘。最后加入100 μL 0.1 M H₂SO₄終止反應，在450nm波長下讀數。 

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ICP0388             Acetylated lysine antibody, Agarose     0.5mL/￥3150
ICP0381        Anti-acetylated lysine HRP conugates     100 μg/￥2450
ICP0385     Anti-acetyl Lysine, FITC Conjugates           100 μg/￥2000
ICP0380      Anti-acetyl Lysine (anti-ACK)                   100 μg/￥1750
ICP0383      Anti-acetyl Lysine, biotin conjugate            100 μg/￥2000



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ICP9701   Anti-Rabbit IgG HRP       1mg/￥525
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