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細胞總乙;降目焖贉y定方法
細胞總乙酰化水平的快速測定方法----免疫親和色譜-ELISA方法
服務類別:免疫與抗體總訪問:3493
最后更新:2010-8-26半年訪問:1
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 細胞總乙;降目焖贉y定方法 -------免疫親和色譜-ELISA方法

步驟一:親和色譜分離提純乙;鞍

1.用細胞裂解液裂解細胞,10000rpm離心2分鐘,取上清備用。
2.取20-40 μL抗乙;嚢彼峥贵w填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388), 用PBS洗2次,每次1mL。
3.將細胞裂解上清液與洗好的填料(ICP0388)混勻,39oC旋轉搖床低速孵育60分鐘。
4.1000rpm離心1分鐘,去上清,用PBSt重懸沉淀,1000rpm離心1分鐘,去上清,重復3次,最后一次用PBS洗,吸棄上清。
注:細胞裂解液里應該含有蛋白酶抑制劑,組蛋白乙酰化酶抑制劑等。

步驟二:釋放及包被固定分離提純的乙酰化蛋白                                    
5.用20 μL0.1M HCL將步驟2的抗賴氨酸抗體填料-乙酰化蛋白復合物于沸水中煮2分鐘,10000rpm離心1分鐘,將上清液體全部轉移到含有80 μL的0.2M Na2CO3的ELISA薄板上,39oC孵育30分鐘;
6.取出ELISA薄板,拍干。用PBSt清洗2次,每次均需拍干。加入100 μL含0.5%BSA的PBSt ,39 ℃封閉10分鐘。


步驟三:用抗乙酰賴氨酸抗體HRP標記物檢測蛋白乙;

7.取出ELISA薄板,拍干,用PBSt清洗2次,拍干。加入100 μL濃度為0.25 μg/mL抗賴氨酸抗體HRP偶聯復合物(Anti-acetylated lysine HRP conugates,ICP0381),39 ℃孵育30分鐘。
8.取出ELISA薄板,拍干,用PBSt清洗板孔3次,每次均需拍干。加入100 μLTMB液,39 ℃孵育顯色10-20分鐘。最后加入100 μL 0.1 M H2SO4終止反應,在450nm波長下讀數。 

乙;盗锌贵w、內參抗體及二抗推薦:

乙;盗挟a品推薦

產品編號                  產品名稱                                           包裝/價格
ICP0388             Acetylated lysine antibody, Agarose     0.5mL/¥3150
ICP0381        Anti-acetylated lysine HRP conugates     100 μg/¥2450
ICP0385     Anti-acetyl Lysine, FITC Conjugates           100 μg/¥2000
ICP0380      Anti-acetyl Lysine (anti-ACK)                   100 μg/¥1750
ICP0383      Anti-acetyl Lysine, biotin conjugate            100 μg/¥2000



二抗推薦
產品編號       產品名稱                    包裝/價格
ICP9701   Anti-Rabbit IgG HRP       1mg/¥525
ICP9702   Anti-Human IgG HRP      1mg/¥525
ICP9704   Anti-Canine IgG HRP      1mg/¥525
ICP9705    Anti-Bovine IgG HRP     1mg/¥525
ICP9703    Anti-Mouse IgG HRP     1mg/¥525
ICP9706    Anti-Chiken IgG HRP     1mg/¥525


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