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Rhod-2AM線粒體鈣信號熒光探針的優勢、應用及使用技巧

瀏覽次數:366 發布日期:2025-6-19  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
Rhod-2AM 是一種常應用于細胞鈣離子檢測的熒光探針,尤其在 線粒體鈣信號(Mitochondrial Ca²⁺ Signaling) 研究中具有獨特優勢,在細胞生物學研究中發揮著重要作用。
 
1.為什么選擇 Rhod-2AM 研究線粒體鈣?
高靈敏度:對低濃度 Ca²⁺(~nM-μM 范圍)響應靈敏。
線粒體靶向性:優于其他鈣探針(如 Fluo-4、Fura-2),減少胞質信號干擾。
雙模式檢測:適用于熒光顯微鏡(實時成像)和流式細胞術(群體分析)。
多通道兼容性:可與綠色熒光探針(如Fluo-4 AM)或藍色核染料(如Hoechst)聯用,實現多參數分析。
 
2.應用場景示例
線粒體鈣與細胞凋亡:檢測凋亡刺激(如 STS)下線粒體鈣超載與 mPTP 開放的關系。
能量代謝研究:結合 Seahorse 分析儀,關聯鈣信號與 OXPHOS 效率。
神經元活動:研究突觸后線粒體鈣瞬變(如與電生理聯用)。
 
3.使用技巧與注意事項
3.1優化染色條件
A.細胞密度:建議1X105 cells/mL,避免過度擁擠影響染料加載。
B.孵育時間:30-45分鐘(37℃),過長可能導致染料外排或細胞毒性。
 
3.2干擾因素控制
A. 避免使用含血清培養基(酯酶活性干擾),加載后徹底清洗減少背景信號。
B. 線粒體膜電位崩潰劑(如CCCP)可驗證染料定位特異性。
 
3.3數據分析: 
使用比率法(如與TMRM聯用)校正膜電位變化對熒光強度的影響。

圖示:
圖2.利用激光掃描共聚焦顯微鏡分析了細胞內游離 Ca2+ 的分布情況。

細胞內游離 Ca2+ 通過紅色熒光探針Rhod-2 AM進行檢測。細胞核用 DAPI(藍色)染色。攜帶 eGFP 報告基因的 pEZ-LV203 載體產生了綠色熒光蛋白。
發布者:西安百螢生物科技有限公司
聯系電話:029-68064558
E-mail:zx@tjbiolite.com

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