在科技飛速發展的當下,分子生物學技術如強勁引擎,驅動生命科學領域一路疾馳。核酸藥物研發、遺傳病與感染性疾病診斷、基因研究等前沿領域,正以前所未有的速度革新突破。每一次研究躍進、每一項精準診斷、每一款創新藥物問世,都離不開大量寡核苷酸的堅實支撐。寡核苷酸合成宛如一場精密“分子盛宴”,固相亞磷酰胺法是這場盛宴的“主廚”,而固相載體則是默默奉獻的“幕后英雄”。
寡核苷酸固相合成流程
在寡核苷酸固相合成中,可控微孔玻璃(CPG)和聚苯乙烯(PS)是應用廣泛的“明星選手”。
CPG 載體是“全能戰士”,以二氧化硅為材質,廣泛應用于寡核苷酸固相合成。其球體內部如“微觀迷宮”,布滿不規則孔道且孔徑穩定。孔徑大小與合成片段長度相關,大孔徑適合長片段合成,能減少空間位阻,提高效率和產率;小孔徑更適合短片段合成,可減少擴散和丟失,保證準確性和純度。此外,CPG 載體生物相容性好,不與生物分子反應,能保護其活性和結構,表面還易于化學修飾,可引入不同功能基團,拓展應用范圍。不過,它負載量較低(<100 μmol/g),限制了大規模合成應用。
通用型CPG載體結構
PS 載體是“大力士”,負載量高(350 μmol/g),能輕松勝任大規模合成,提高生產效率和經濟效益,且加工性能好,可制成不同形狀和尺寸顆粒,滿足不同設備和工藝需求。但它也有缺點,溶脹性高,合成時消耗大量溶劑,增加成本和環境壓力,還可能導致顆粒團聚,影響反應效率和均勻性。
與 PS 載體相比,CPG 載體優勢突出:
化學與生物優勢:化學穩定性極高,極端條件下溶劑效應更小;生物相容性好,能保護生物分子活性,在需保持生物分子活性的場景中優勢明顯。
孔徑與效率優勢:孔徑可控,能根據合成需求選擇不同孔徑產品,精確控制孔徑可優化合成條件,減少空間位阻和副反應,合成較長鏈寡核苷酸時優勢更顯著。
機械與特定場景優勢:機械強度高,能承受機械操作,保持完整均勻;在 gRNA 合成、引物合成、檢測探針合成和早期藥物篩選等對合成產物純度和質量要求高的領域應用廣泛,雖負載量低,但在這些特定場景下成本效益高,能帶來更高實驗成功率和更低后續處理成本。
一表對比PS和CPG載體:
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