空白對照的定義及其在ELISA測定中的應用

空白對照是指在實驗設計中設置的一種陰性對照，旨在監測非特異性背景信號，并為基線吸光度值提供參考。在酶聯免疫吸附測定（ELISA）中，通過引入空白對照，可以有效識別并扣除樣品讀數中的背景噪聲，從而提高檢測結果的準確性。然而，在多分析物ELISA測定中，由于其固有的高背景信號特性，這種標準化方法可能并不適用。本文將詳細探討為何在Cygnus的ELISA測定中通常不建議使用空白對照。

減去背景值對多分析物ELISA檢測結果的影響

在多分析物ELISA測定中，如HCP ELISA，由于HCP抗體的復雜性，其背景信號通常較高。這使得此類檢測的基線吸光度值（OD值）普遍高于簡單的單分析物檢測。從統計學角度來看，從樣品讀數中減去較高的基線OD值可能會增加數據的變異程度，從而影響結果的準確性和可靠性。

以下示例說明了背景值扣除對變異系數的影響。在表1中，標準A的平均OD值為0.100，標準B的平均OD值為0.150 。當通過原始讀數減去空白對照的OD值來計算變異系數（CV）時，CV值顯著上升，導致標準B的CV%從6.7%增加至20%。

 

檢測背景值越高，對變異系數百分比的影響就越大。

 

表2展示了8種不同ELISA試劑盒在10組隨機數據集中的平均變異系數（CV%）。基于原始OD值計算得出的CV%范圍為10%至20%，而經過空白對照校正后的相同數據CV%則超過了20%。在所有情況下，經過空白對照校正后的CV%均高于未校正的數據。在實際應用中，分析數據放行的標準通常要求重復檢測的CV%不超過20%，上述差異可能直接導致分析結果無法滿足精密度要求，從長遠來看，引入空白對照將直接導致測試結果無法符合放行要求。

 

從統計學角度來看，空白對照的OD值越高，出現此類問題的可能性就越大。

 

鑒于上述原因，Cygnus Technologies 致力于開發和提供無需背景校正的 ELISA 試劑盒。在我們已上市的 ELISA 試劑盒開發、分析及測試過程中，從未在批次放行的工作流程中引入空白對照校正步驟。相反，我們使用 0 ng/mL 標準品來設定 Y 軸截距并確定標準曲線的下限。因此，如果您在實驗流程中加入了空白對照校正步驟，其獲得的檢測變異系數（CV）百分比很可能會高于 Cygnus 質控團隊所記錄的結果。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應的QS（Qualification Summary）文件，如有需求歡迎點擊這里填寫信息索取，或直接聯系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題，我們的技術支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。

 

Cygnus Technologies專注為生物技術和生物制藥行業提供產品和分析方法超過25年，旨在加速研發階段和提高產品質量。Cygnus開發和生產的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測超過50種不同表達系統的特異性雜質。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家，其產品和服務已經被全球超過95%以上生物制藥公司使用，并獲得FDA、NMPA、EMA等監管機構的廣泛認可。

北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理，與國內眾多知名藥企，CRO/CMO企業建立了長久穩定的合作關系。多年來西美杰的產品及服務幫助許多企業加速R&D階段，提高藥物質量、純度和安全，加速優化研發工藝，減少產品上市時間，降低QC成本。如您對上述產品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網站www.xmjsci.com了解更多信息。