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Diamond Protein L親和層析填料純化抗體片段案例分享

瀏覽次數:997 發布日期:2024-8-23  來源:博格隆微信公眾號
背景介紹
Protein L
蛋白L(Protein L)是從大型消化鏈球菌(Peptostreptococcus magnus)中分離得到的一種多結構域細胞壁蛋白,與抗體的kappa輕鏈的可變區域相互作用,特別是K1、K3和K4輕鏈,使其能夠與大約67%的人免疫球蛋白和99%的小鼠免疫球蛋白結合[1]

Diamond Protein L親和層析介質
Diamond Protein L是將Protein L配基同高剛性瓊脂糖基架偶聯后制成的一種新型親和層析介質。相較于常規介質,高剛性瓊脂糖基架流速更快,反壓更低。Protein L配基與抗體kappa輕鏈的可變區有很強的親和性,所以Diamond Protein L適用于從大批量細胞培養液中捕獲各種不同大小的抗體片段,如 F(ab')2、Fab、單鏈可變片段(scFv)和半抗。

L-1Fig. 1 抗體IgG和抗體片段示意圖


Diamond Protein L的主要特性
• 高剛性瓊脂糖基架:高流速,可提高生產效率
• 高特異性的kappa輕鏈:可高效捕獲廣泛選擇的抗體和抗體片段
• 高結合載量:能減少工藝時間和介質使用量,降低生產成本 

Diamond Protein L技術參數

L-2+顆粒大小呈正態分布,平均顆粒大小是填料體積分布累計的中值粒徑
++線性流速 100cm/h,柱高 10cm,緩沖液條件:20mM PB、0.15M NaCl,pH7.2
+++2%苯甲醇僅用于國外運輸或者客戶指定

實際應用案例——半抗親和層析
• 層析填料: Diamond Protein L
• 樣品和上樣量:某半抗,30mg/mL填料
• 平衡緩沖液:20mM Tris-HCl,0.15M NaCl,pH7.2
• 洗脫緩沖液:50mM Gly-HCl,pH2.9
• CIP緩沖液: 15mM NaOH

L-3Fig. 2 Diamond Protein L親和層析圖譜

L-4Fig. 3 Diamond Protein L親和層析純化結果

使用Tips
緩沖液選擇

• 結合緩沖液:通常采用中性緩沖液,如:20mM PB,0.15M NaCl,pH7.2
• 洗脫緩沖液:采用低pH緩沖液,如:0.1M檸檬酸鈉 pH2.0~3.5

提高洗脫產品純度
在洗脫步驟可以通過pH線性梯度洗脫,優化出合適的洗脫pH范圍。對于具有挑戰性的抗體或抗體片段,純化中通過優化洗脫緩沖液濃度,可以進一步去除洗脫產品中的聚集體等相關雜質[2]

在位清洗
如果洗脫產品收率異常,建議在CIP之前先進行再生。在用NaOH進行CIP之前,建議先用中性pH溶液平衡層析柱,避免低pH下緩沖液與高pH NaOH溶液直接接觸而可能導致的柱內溫度升高的問題。
發布者:博格隆(浙江)生物技術有限公司
聯系電話:400-820-5172
E-mail:info@bestchrom.com

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