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磁珠法糞便提取試劑盒操作指南

瀏覽次數(shù):1456 發(fā)布日期:2021-1-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
 

常規(guī)樣本的核酸提取

想必已不再是實(shí)驗(yàn)黨們頭疼的對象了吧

然鵝,糞便基因組DNA提取步驟實(shí)在繁瑣

還可能遇到提取濃度低,純度差等問題

簡直天崩地裂啊

沒關(guān)系,這點(diǎn)小事MP幫你解決!

拿好這份指南

讓你的糞便DNA提取實(shí)驗(yàn)事半功倍
 

 【 一圖了解提取步驟 】
 

【 PART 01-預(yù)洗 】
 
預(yù)洗是雜質(zhì)去除的關(guān)鍵步驟,由于糞便樣本中可能含有多種可溶性雜質(zhì),如膽紅素、膽汁鹽、腐殖酸、植物源性多糖等。對于成分復(fù)雜的糞便樣本,倘若不進(jìn)行預(yù)洗,這些雜質(zhì)會在細(xì)胞及菌體裂解后,混合在釋放的核酸中,并與核酸競爭性結(jié)合磁珠,雜質(zhì)與磁珠結(jié)合后,在洗脫時(shí)與磁珠分離,導(dǎo)致洗脫的DNA有顏色,純度低。
 

預(yù)洗操作

1.向Lysing Matrix E管中加入樣本,再加入1mL Pre-wash Buffer,用渦旋震蕩儀渦旋至糞便樣本被完全重懸起來。

2.因糞便狀態(tài)而異,渦旋時(shí)間控制在1min以內(nèi),時(shí)間過長會導(dǎo)致一部分細(xì)胞或菌體破裂,損失一部分DNA。

3.12000rpm,離心5min,棄去上清,保留沉淀。


除了按照預(yù)洗操作執(zhí)行以外,對于各類型的樣本也會有不同注意事項(xiàng):
 



【 PART 02-裂解與去雜 】

裂解:樣本預(yù)洗后,向Lysing Matrix E中依次加入裂解液的三種成分:Lysis Buffer F1、Lysis Buffer F2、RNase A,渦旋混勻。
使用FastPrep-24TM 5G研磨儀,5 m/s,研磨40s或用渦旋震蕩儀以最大速度渦旋10 min,離心后保留上清液,棄去沉淀。
 

去雜質(zhì):將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中,添加去雜劑:PPS,主要用于去除蛋白等雜質(zhì)。在4℃放置5 min能提高效果,離心后,保留上清液,棄去沉淀。
 

【 PART 03-結(jié)合-漂洗-洗脫 】

圖 |磁珠法提取
 

這三個(gè)步驟可以手工操作,也可以配合自動(dòng)化核酸提取儀實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化批量操作。一般來說,手工提取預(yù)計(jì)在40-45 min左右完成,采用MP公司的24孔磁力架(貨號 116570413),可以一次處理24個(gè)樣本。而采用自動(dòng)化儀器提取,隨著樣本數(shù)量的增加,操作時(shí)間并不延長,樣品處理量成倍增加,效率大大提高,從此解放雙手。
 


圖 |24孔磁力架

手工操作






自動(dòng)化操作
1. 將400 µL上清液轉(zhuǎn)移至 96 孔板從左至右的第二列中,并按照下表在各添加其他試劑。 


2. 按照下表設(shè)置程序,運(yùn)行自動(dòng)化核酸提取儀。


【 訂購信息 】



如有任何技術(shù)問題,歡迎來電咨詢400-1500-680或添加官方微信:MPBiomedicalsSH,
我們可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需求,提供定制化解決方案~

發(fā)布者:安倍醫(yī)療器械貿(mào)易上海有限公司
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