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鈣離子熒光探針Calbryte 520.AM在動態監測中的核心優勢與應用解析

瀏覽次數:317 發布日期:2025-6-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
AAT Bioquest新型鈣離子熒光探針Calbryte 520, AM是一種高性能的熒光染料,廣泛應用于活細胞鈣離子(Ca²⁺)動態變化的實時監測。以下是其應用領域及核心優勢的詳細分析:
 
一、主要應用領域
活細胞鈣成像
神經元活動研究:監測動作電位或神經遞質釋放觸發的鈣瞬變,適用于腦片或原代神經元。
心肌細胞研究:分析心肌收縮過程中的鈣振蕩及信號傳導。
免疫細胞激活:檢測T細胞、巨噬細胞等免疫應答時的鈣信號。
高通量篩選
用于藥物開發中靶向鈣通道或GPCR受體的化合物篩選(如拮抗劑/激動劑效應評估)。
多參數熒光聯用
兼容GFP/RFP等熒光蛋白或其他探針(如線粒體染料),支持多色成像。
長期動態追蹤
適用于數小時的長時間鈣信號記錄(如晝夜節律相關研究)。
 
二、核心優勢
卓越的光穩定性與信噪比
相比傳統探針(如Fluo-4),Calbryte 520的熒光強度更高,光漂白速率更低,適合長時間或高分辨率成像(如共聚焦、雙光子顯微鏡)。
更高的鈣親和力與靈敏度
Kd ~320 nM,在低鈣濃度下仍能清晰響應,可檢測微小的鈣波動(如亞細胞器鈣釋放)。
優異的細胞滲透性與負載效率
乙酰氧甲酯(AM)形式:無需顯微注射,溫和穿透細胞膜,且胞內酯酶水解效率高,適合難轉染細胞(如原代細胞、干細胞)。
低細胞毒性
長時間孵育(如>2小時)對細胞活性影響較小,減少實驗干擾。
兼容性廣泛
激發/發射波長(Ex/Em: 490/520 nm)適配常規FITC濾光片系統,與流式細胞儀、微孔板讀數儀等設備匹配。
pH不敏感性
在生理pH范圍內(6.5-8.0)熒光信號穩定,避免因代謝酸化導致的假陽性。
 
三、使用注意事項
負載條件優化:建議使用含Pluronic F-127的緩沖液(如HBSS)增強疏水性AM酯的溶解性。
校準建議:需結合鈣離子載體(如ionomycin)和EGTA進行原位校準,以定量絕對鈣濃度。
多色實驗設計:需注意與其他探針的光譜重疊(如綠色通道),建議通過線性 unmixing 校正。
 
四、對比傳統探針(如Fluo-4, Rhod-2)
特性 Calbryte520, AM Fluo-4, AM Rhod-2, AM
Kd (nM) ~320 ~345 ~570
信噪比 中等 較低(紅色通道)
光穩定性 ★★★★★ ★★★☆☆ ★★★★☆
胞內滯留性 優(低泄漏) 中等 易泄漏
 
Calbryte 520, AM憑借其高靈敏度、低毒性及廣泛的兼容性,成為復雜鈣信號研究(如神經科學、藥理學)的理想工具,尤其在需要長時間或高時空分辨率成像的實驗設計中優勢顯著。

圖示:
圖1.Calbryte 520 AM(# 20653)和 Fluo-4, AM(# 20550)在 CHO-K1 細胞中測量了 ATP 反應。CHO-K1 細胞以每孔 50,000 個細胞/100 µl的密度在 96 孔黑色壁/透明底 Costar 板中過夜培養。向孔中加入 100 µl 10 µg/ml Calbryte 520 AM 或 10  µg/ml Fluo-4, AM 的 HH 緩沖液,在 37°C 下孵育 45 分鐘。移除兩種染料加載溶液,每孔加入 200 µl HH 緩沖液。每孔加入 50 µl ATP,以達到最終濃度為 10 µM。在 Keyence 顯微鏡的 FITC 通道中獲取圖像。
 
圖2.通過激光掃描共聚焦顯微鏡分析了細胞內游離鈣離子的分布情況。細胞內游離鈣離子通過紅色熒光探針Rhod-2 AM(#21060)進行檢測。細胞核用 DAPI(藍色)染色。攜帶 eGFP 報告基因的 pEZ-LV203 載體產生綠色熒光蛋白。
發布者:西安百螢生物科技有限公司
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標簽: 熒光探針
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