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活細胞成像監控NK細胞:突破傳統檢測,讓細胞監測變成“直播”

瀏覽次數:599 發布日期:2025-2-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
前言:
自然殺傷(NK)細胞是先天免疫系統的重要組成部分,其無需事先敏化即可識別并消滅惡性或病毒感染細胞。在前臨床研究中,NK細胞殺傷實驗用于評估NK細胞療法的效果。這些實驗通過將NK細胞與熒光標記的靶細胞共培養,測量靶細胞裂解程度以評估NK細胞活性。然而,傳統染料如Calcein-AM的快速泄漏影響了實驗的準確性。本研究采用綠色熒光染料CellTracker CMFDA及Celloger® Pro自動活細胞成像系統,改善了檢測精度。
 
材料與方法:
靶細胞制備:
  • 使用U-2OS細胞,分三種條件:
    • 穩定表達EGFP標記的H2B;
    • 使用Calcein-AM染色;
    • 使用CellTracker CMFDA染色。
  • 各組細胞在無血清培養基中染色后,于48孔板中以3×10⁴密度接種,并與NK-92效應細胞按不同效應/靶(E:T)比(5:1、10:1、20:1)共培養。
  • 通過4倍物鏡的 Celloger® Pro 在24h內每間隔1h采集圖像,使用 Celloger® 分析軟件對實驗結果進行分析,通過紅綠熒光強度比值以評估NK細胞毒性。
 
結果:

圖 1. NK-92 與表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞的殺傷試驗
(A) NK-92 細胞與表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞按 5:1、10:1 和 20:1 的不同效應物與靶標(E:T)比例共培養。在 24 小時內,每小時用配備 4 倍鏡頭的 Celloger® Pro 采集一次圖像。(B)圖中顯示了表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞在 24 小時內的熒光強度比(紅/綠),比較了三種不同的 E:T 比率: 5:1、10:1 和 20:1。

圖 2. 用活細胞染色染料對 U-2OS 細胞進行的 NK-92 殺傷試驗
(A、B)NK-92 細胞與 U-2OS 細胞共培養,用Calcein-AM(A)或 CellTracker CMFDA(B)染色,效應物與靶標(E:T)的比例分別為 5:1、10:1 和 20:1。在 24 小時內每小時用 Celloger® Pro 4X 采集一次圖像。(C)圖中顯示了 U-2OS 細胞在 24 小時內用Calcein-AM 或 CellTracker CMFDA 染色后的熒光強度比(紅/綠),比較了三種不同的 E:T 比率: 5:1、10:1 和 20:1。

圖 3. CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 的染色保留比較
(A)比較 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 在 U-2OS 細胞中 24 小時的染色保留時間的延時圖像。(B)圖中顯示的是歸一化綠色熒光強度值,比較了 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 隨時間變化的保留情況。
 
  • 熒光標記細胞: GFP-H2B靶細胞的實驗表明,隨著E:T比增加,紅熒光(死亡細胞)強度上升,綠熒光(活細胞)下降,且細胞聚集增多。
  • 染料比較: CellTracker CMFDA在染料保持性及長時間追蹤方面優于Calcein-AM。CMFDA熒光信號穩定超過12小時,避免了Calcein-AM的快速泄漏引起的誤差。
  • 優點總結: CellTracker CMFDA具有更高靈活性,適合快速高效的實驗設置,而GFP表達細胞系雖精確但制備耗時且成本高。
 
亮點總結
1️⃣ 創新監測方法使用Celloger® Pro自動化活細胞成像系統,結合優化染色試劑,實現更精準的NK細胞毒性分析。
2️⃣ 穩定性對比實驗顯示CellTracker CMFDA染劑相較傳統Calcein-AM染劑,具有更高的細胞內保留率和更低的漏染,確保實驗數據的可靠性。
3️⃣ 實時觀察Celloger® Pro可直接觀測細胞形態變化及死亡過程,為細胞毒性研究提供更深層次的洞察。
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  • 熒光和明場鏡頭
憑借雙色熒光和明場鏡頭,Celloger® Pro可以拍攝高質量和高分辨率圖片。
  • 可更換的物鏡
Celloger® Pro為用戶提供可更換的物鏡,為研究人員的不同需求提供靈活性。有2X,4X和10X的物鏡供選擇,用戶可以自由切換。
  • 兼容多種培養容器
Celloger® Pro 適配多種holder以適用多種不同類型的細胞培養容器,包括孔板、T形瓶、載玻片。
  • Celloger® Pro 應用場景
發布者:Curiosis Inc.
聯系電話:18118128515
E-mail:yuanyaling@kaltec.cn

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