九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)試劑盒說明書

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)試劑盒說明書

瀏覽次數:1203 發布日期:2023-4-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)試劑盒說明書
                                                       微量法100T/96S
 
    :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖(UDPG)。
 
測定原理
UGP可逆催化反應生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉化為NADPH,340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
 
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板
 
試劑組成和配制  
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑五:液體2mL×1瓶,4℃保存。
 
酶液提取
  • 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
  • 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
  • 液體:直接檢測。
 
測定操作
  • 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
  • 取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL試劑一,20μL試劑二,20μL試劑三,20μL試劑四,20μL試劑五,20μL粗酶液,充分混勻,記錄340nm處30s的吸光值A1和330s的吸光值A2,△A=A2-A1
 
 
計算公式
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
(3)按照細胞數量計算
酶活單位定義:每104個細胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細胞數量
(4)按照液體體積計算
酶活單位定義:每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T=321.54×ΔA
V反總:反應體系總體積,0.2mL;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
 
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
(3)按照細胞數量計算
酶活單位定義:每104個細胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總) ÷T
=643.08×ΔA÷細胞數量
(4)按照液體體積計算
酶活單位定義:每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T=643.08×ΔA
V反總:反應體系總體積,0.2mL;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g 
發布者:上海雅吉生物科技有限公司
聯系電話:021-34661276
E-mail:58268971@qq.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 蒲城县| 天等县| 米脂县| 永善县| 崇仁县| 南和县| 崇州市| 肇源县| 陇西县| 通许县| 民丰县| 万安县| 凤翔县| 木兰县| 商洛市| 永康市| 康定县| 盐山县| 湘乡市| 正宁县| 江山市| 从江县| 正定县| 建宁县| 九龙坡区| 满城县| 湖州市| 安乡县| 仁布县| 霍州市| 厦门市| 团风县| 广元市| 思茅市| 莎车县| 辽宁省| 昭平县| 田林县| 甘肃省| 阜康市| 曲周县|