細胞轉染的幾種方式介紹和對比
轉染 (Transfection): 是借助一定手段人工引入外源核酸 (DNA 或 RNA) 進入細胞的過程。轉染目的: 是特異性增強或抑制轉染細胞中外源基因表達。
轉染的分類
轉染類型: 根據在宿主細胞表達時間長短，分為瞬時轉染和穩定轉染。瞬時轉染中，外源基因沒有整合到基因組上，僅存在于游離載體，短時間內可獲得基因表達產物。穩定轉染中，外源基因整合到了基因組，可長期穩定地獲得目的蛋白。
圖 1. 瞬時轉染和穩定轉染[1]
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由于陽離子聚合物法操作簡單，轉染效率高，一般是科研用戶的常客。所以小 M 給大家介紹細胞轉染過程中，陽離子聚合物轉染的原理和操作步驟。
陽離子聚合物法
圖 2. 陽離子聚合物法轉染原理[2]
轉染試劑與外源核酸形成陽離子聚合物，胞吞到細胞，最終導致基因產物“蛋白”的產生
優點: 與其他方法相比，對多種常用細胞具有高水平轉染效率；對原代細胞和難轉染細胞也具有較好的效果；高效低毒、操作簡便、重復性好。
操作步驟
1. 使用完全生長培養基將細胞按照一定細胞密度，鋪板于 96 孔細胞培養皿中，100 μL/well，于 37℃，5% CO2 細胞培養箱中，過夜貼壁生長；
2. 當細胞密度達到 70-90% 時，吸去原培養基，并加入無菌 PBS 緩沖液洗滌 2 次 (貼壁性較差的細胞，可省略此步驟)。加入無血清培養基 80 μL/well；
3. 96 孔板通常轉染 0.25 μg/20 μL/well DNA 進行轉染。根據 DNA (μg)：轉染試劑 (μL)= 1：3 比例制備轉染試劑/ DNA 無血清培養基復合物，輕輕混勻，室溫靜置 15 min。
具體每孔轉染試劑、DNA 及培養基用量如下表所示：
圖 2. 轉染步驟及轉染效率檢測
采用 MCE PolyFast 轉染試劑 (HY-K1014)，將外源基因瞬時轉染到細胞。轉染 24-48 小時，通過熒光實驗評價轉染效率。結果顯示：在 293T 細胞中，RFP 陽性細胞比例高達 95%；在 BHK-21 細胞中，與競品公司轉染試劑比較，MCE PolyFast 轉染試劑存在明顯優勢。Tips: 在熒光實驗過程中，可以適當加入抗熒光淬滅劑 (HY-K1042)，緩解各種熒光染料的熒光淬滅，輔助轉染效率的熒光檢測。
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相關產品 |
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是一種以非脂質體陽離子聚合物為主要成分的高效轉染試劑。 |
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參考文獻
[1] Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future[J].Anal Bioanal Chem. 2010 , 397(8):3173-8.
[2] Fus-Kujawa A, Prus P, Bajdak-Rusinek K, Teper P, Gawron K, Kowalczuk A, Sieron AL.An Overview of Methods and Tools for Transfection of Eukaryotic Cells in vitro[J].Front Bioeng Biotechnol. 2021 , 9:701031.
