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影響凝膠過濾層析的多種因素介紹

瀏覽次數:1869 發布日期:2024-5-13  來源:泰渡生物公眾號
  凝膠過濾簡介

在層析技術中,凝膠過濾(又稱為分子排阻色譜),是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由于設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。主要用于高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。
 凝膠過濾看似非常簡單直接,其實影響凝膠過濾結果的因素很多。

影響凝膠過濾層析的多種因素

一 裝柱過程

①層析柱必須有柱頭及適配器,緊壓膠面完合沒有空隙,否則樣品上樣受影響。

②將填料裝填到空柱管中時,凝膠懸浮液不可太稠,否則很容易出氣泡;太稀裝柱時間過長,亦影響效果。50- 70%較適合。若是干粉,溶脹時間必須充足。裝前完全攪勻。

③一次性倒入層析柱中,容量不夠則需加裝柱器。切不可分幾次倒,柱效和對稱性都很難合格。

④裝柱及層析工作所用緩沖液的溫度需一樣。

⑤柱底網下的氣泡一定要除掉,可先用20%乙醇濕一下底網。

⑥每種膠在不同柱高下的裝柱流速、壓力都不一樣。一定要查詢對應的凝膠說明書,按照標準執行。

二 使用過程

①樣品需經過過濾處理,一些實驗室由于樣品凈度等問題,層析柱使用一段時間后上篩板堵塞,柱壓較高上部柱床塌縮,就會在膠面與篩板之間形成水層,分離效果就會大受影響。

②上樣前柱平衡非常重要,不光UV平穩,至少平衡一個柱體積。

③緩沖液pH值會影響分離效果,經驗中用pH7.0和pH4.5的緩沖液分離5個低分子量標準蛋白,結果頗有不同。

④加入0.15M NaCl可防止非特異性的吸附及蛋白間的聚合。
 
發布者:泰渡生物科技(蘇州)有限公司
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