在生化分析測量中，酶的測定比較復(fù)雜，要求條件較高，測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，其它項(xiàng)目的測定一般都會沒有問題。現(xiàn)就生化分析儀酶分析中常見的測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差的幾點(diǎn)原因進(jìn)行分析，以供使用者和維修工程師參考。

 

生化分析儀酶的測定一般用動力學(xué)法進(jìn)行測試，其原理是在酶反應(yīng)的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期與被測物的活性或濃度成正比。計(jì)算方法有兩種：

1）絕對法：

酶活力(U/L)＝ΔA×(反應(yīng)液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))

2）相對法：

(U/L或mmol/L)＝［ΔA(測定)/ΔA(標(biāo)準(zhǔn))］×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度

因此，生化分析儀酶的測定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置，如：波長、溫度、參數(shù)、測試方法，延遲和測試時(shí)間，吸液量等。另外還與廠家的試劑，樣品的采集、保存有關(guān)，同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控，從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系。

 

例如GPT的測試一般選擇為：波長為340nm，測定時(shí)間為20秒，延遲時(shí)間為40秒，吸液量為350μl，溫度設(shè)定為37℃，試劑空白可任意選擇。

 

因此GPT的測試結(jié)果與以下幾點(diǎn)有關(guān)：

 

1、340nm為波長低端，能量較低，同時(shí)340nm濾光片使用較多，易老化。所以波長漂移不準(zhǔn)，半寬度變化都會影響測量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

 

2、動態(tài)法測試有延遲時(shí)間，測試時(shí)間要求。延遲時(shí)間在動態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時(shí)間，測試時(shí)間在動態(tài)法中為測試的總時(shí)間。零級動力學(xué)法是針對特定時(shí)間段而言的，酶反應(yīng)剛啟動時(shí)反應(yīng)比較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多，必需經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期，各試劑商對這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。所以動態(tài)法測試一般溫度在37℃，延遲時(shí)間不少于15秒為好。

 

3、對于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。

 

4、反應(yīng)溫度。

 

5、測試空白要準(zhǔn)確。

 

6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復(fù)性，建議測試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加。一般應(yīng)大于400μl，一般項(xiàng)目為500μl即可。

 

7、測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡；光源燈老化；光源電壓不穩(wěn)；340nm濾光片性能變差，透射性變小；波長不準(zhǔn)確等有關(guān)。一般檢查液路接口是否松動漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題，加熱元件損壞，溫度不受控的問題只能由工程師解決。

 

總之酶的測定影響準(zhǔn)確度的因素很多，只要認(rèn)真操作，綜合分析影響測定的各項(xiàng)因素，認(rèn)真分析，酶測定的問題不難解決的。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)只要試劑、樣品準(zhǔn)確，保存得當(dāng)，樣品預(yù)處理仔細(xì)，儀器經(jīng)常維護(hù)、保養(yǎng)，認(rèn)真操作，問題會自行解決。