H9C2細胞培養中的實操技巧和常見問題解答
【產品介紹】
H9c2(2-1)是來源于胚胎BD1X大鼠心臟組織的原始克隆細胞系的亞克隆，具有骨骼肌的許多特性。該細胞系可用于心血管疾病的研究。該細胞表現出許多骨骼肌的特性，且該細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發生得很快。目前H9c2(2-1)細胞已被廣泛用于研究心臟生物學和疾病的各個方面。
H9c2(2-1)是原始克隆細胞系的亞克隆，該細胞系由Kimes .和Brandt .從胚胎BD1X大鼠心臟組織獲得，并顯示出骨骼肌的許多特性。 這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。 如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發生得很快。
H9c2(2-1)細胞培養時存在少量圓形貼壁細胞，為正常的細胞增殖現象。細胞處于不同增殖周期，具體形態會有差異，例如分裂期細胞通常會變小變立體呈圓形甚至脫落，而分裂間期細胞會鋪展比較開，這些都是正常增殖現象。以下是中喬新舟拍攝的不同放大倍數的H9C2的細胞圖：
4X
10X
20X
細胞名稱：H9C2大鼠心肌細胞
細胞別名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2
產品貨號：ZQ0102
生長特性：貼壁生長
培養條件：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ500-A）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）
完全培養基貨號：ZM0102
培養環境：95%空氣，5%二氧化碳；37℃
【傳代培養】
該細胞為貼壁生長：
1、細胞有脫落情況時，將培養液轉移到無菌離心管中，離心（125g，3～5分鐘）1000-1200rmp收集懸浮細胞（漂浮細胞少，可能無沉淀，大部分在管壁上）；輕柔去除培養基，等貼壁細胞消化收集在一起混勻接種。
2、貼壁細胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到細胞瓶中，輕輕搖勻，使胰酶溶液鋪滿細胞表面，放入培養箱中。1-3min后取出到顯微鏡下觀察，(若細胞無變化繼續放入培養箱消化)一旦細胞變圓、輕拍瓶尾部大部分細胞開始脫落，當達到70-80%細胞漂浮脫落，立即加入5ml完全培養基(含10%FBS)中和。用移液管輕輕吹打6-8次，使細胞充分解離。
3、將細胞懸液轉移到無菌離心管中，計數，離心收集細胞。用適量完全培養基重懸細胞沉淀，使細胞密度為每毫升0.6-2X105。將細胞懸液轉至培養瓶中，靜置于培養箱中。建議T25培養瓶添加5-7ml完全培養基，以后2-3天進行換液。
【細胞凍存】
1、細胞密度80%以上，活細胞百分率達95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2、細胞沉淀用適量4°C凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶T25細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后轉移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉移至液氮中保存。
【細胞復蘇】
1、液氮取出的細胞放入干冰中轉移至細胞房，提前準備好完全培養基，離心管等試劑和耗材。
2、凍管細胞在37°C水浴中迅速解凍（大約1-2分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3、將內容物轉移到含3-6mL完全培養基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5分鐘）1000-1200rmp去除培養基， 管底細胞沉淀用手指彈松，再添加3ml完全培養基至離心管內混勻細胞并進行計數。
4、用適量完全培養基將細胞密度調整至0.6-2.0X105，轉移至培養瓶中，再將瓶轉移至培養箱中靜置培養。T25培養瓶建議添加5-7ml完全培養基。當密度達到80%以上時傳代。
【常見問題】
1、H9C2細胞可以傳幾代?
H9C2細胞系理論上是可以無限傳代的，但是研究發現細胞系也會有老化的；收到細胞后自己具體可以傳多少代，會受到客戶自己養細胞的操作水平技術，操作環境，用的試劑耗材的質量等因素影響。
2、為什么H9C2細胞培養長得慢？
這些因素都會影響細胞長得慢：1）可能是細胞接種得太少，細胞密度太低�？梢韵扰囵B，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養；2）操作時力度沒控制好，將細胞吹碎，狀態變差；3）血清質量不好，影響細胞生長
3、為什么H9C2細胞培養會出現空泡？
1）可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態變差、空泡增多；2）也可能是血清差，需要更換優質血清，及時換液。
4、為什么會出現細胞表面顆粒較多的現象？
可能是培養環境有問題，可以改用中喬新舟的完全培養基（貨號：ZM0102）培養，傳三代后會恢復平整細胞表面。
5、為什么細胞狀態變差，容易漂？
1）可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開
2）也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代，并不是細胞長滿才傳代，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應該就要傳代了。
【注意事項】
1) H9c2(2-1)細胞胞體上有黑色顆粒屬于正�，F象。該細胞對胎牛血清比較敏感，建議使用高質量胎牛血清或購買我司配套完全培養液。
2) 該細胞需要再密度達到60-70%左右進行傳代，過高密度傳代會導致細胞融合形成肌管，導致細胞不增長。如果血清質量不好或血清濃度降低，融合會更快產生。
3) 經過長期的培養，細胞的增殖速度會減慢。這是由于該細胞對培養基的酸堿、血清等及其敏感，一旦細胞融合后就會增殖緩慢，需要定期從新克隆篩選成肌細胞。
細胞接種密度推薦1X10的4次方每平方厘米。
4) 消化時間的把控也是必不可少的一個步驟,防止未充分消化分散的細胞融合導致成肌管細胞的形成。
H9c2(2-1)是來源于胚胎BD1X大鼠心臟組織的原始克隆細胞系的亞克隆，具有骨骼肌的許多特性。該細胞系可用于心血管疾病的研究。該細胞表現出許多骨骼肌的特性，且該細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發生得很快。目前H9c2(2-1)細胞已被廣泛用于研究心臟生物學和疾病的各個方面。
H9c2(2-1)是原始克隆細胞系的亞克隆，該細胞系由Kimes .和Brandt .從胚胎BD1X大鼠心臟組織獲得，并顯示出骨骼肌的許多特性。 這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。 如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發生得很快。
H9c2(2-1)細胞培養時存在少量圓形貼壁細胞，為正常的細胞增殖現象。細胞處于不同增殖周期，具體形態會有差異，例如分裂期細胞通常會變小變立體呈圓形甚至脫落，而分裂間期細胞會鋪展比較開，這些都是正常增殖現象。以下是中喬新舟拍攝的不同放大倍數的H9C2的細胞圖：
4X
10X
20X
細胞名稱：H9C2大鼠心肌細胞
細胞別名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2
產品貨號：ZQ0102
生長特性：貼壁生長
培養條件：DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ500-A）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）
完全培養基貨號：ZM0102
培養環境：95%空氣，5%二氧化碳；37℃
【傳代培養】
該細胞為貼壁生長：
1、細胞有脫落情況時，將培養液轉移到無菌離心管中，離心（125g，3～5分鐘）1000-1200rmp收集懸浮細胞（漂浮細胞少，可能無沉淀，大部分在管壁上）；輕柔去除培養基，等貼壁細胞消化收集在一起混勻接種。
2、貼壁細胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到細胞瓶中，輕輕搖勻，使胰酶溶液鋪滿細胞表面，放入培養箱中。1-3min后取出到顯微鏡下觀察，(若細胞無變化繼續放入培養箱消化)一旦細胞變圓、輕拍瓶尾部大部分細胞開始脫落，當達到70-80%細胞漂浮脫落，立即加入5ml完全培養基(含10%FBS)中和。用移液管輕輕吹打6-8次，使細胞充分解離。
3、將細胞懸液轉移到無菌離心管中，計數，離心收集細胞。用適量完全培養基重懸細胞沉淀，使細胞密度為每毫升0.6-2X105。將細胞懸液轉至培養瓶中，靜置于培養箱中。建議T25培養瓶添加5-7ml完全培養基，以后2-3天進行換液。
【細胞凍存】
1、細胞密度80%以上，活細胞百分率達95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2、細胞沉淀用適量4°C凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶T25細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后轉移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉移至液氮中保存。
【細胞復蘇】
1、液氮取出的細胞放入干冰中轉移至細胞房，提前準備好完全培養基，離心管等試劑和耗材。
2、凍管細胞在37°C水浴中迅速解凍（大約1-2分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3、將內容物轉移到含3-6mL完全培養基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5分鐘）1000-1200rmp去除培養基， 管底細胞沉淀用手指彈松，再添加3ml完全培養基至離心管內混勻細胞并進行計數。
4、用適量完全培養基將細胞密度調整至0.6-2.0X105，轉移至培養瓶中，再將瓶轉移至培養箱中靜置培養。T25培養瓶建議添加5-7ml完全培養基。當密度達到80%以上時傳代。
【常見問題】
1、H9C2細胞可以傳幾代?
H9C2細胞系理論上是可以無限傳代的，但是研究發現細胞系也會有老化的；收到細胞后自己具體可以傳多少代，會受到客戶自己養細胞的操作水平技術，操作環境，用的試劑耗材的質量等因素影響。
2、為什么H9C2細胞培養長得慢？
這些因素都會影響細胞長得慢：1）可能是細胞接種得太少，細胞密度太低�？梢韵扰囵B，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養；2）操作時力度沒控制好，將細胞吹碎，狀態變差；3）血清質量不好，影響細胞生長
3、為什么H9C2細胞培養會出現空泡？
1）可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態變差、空泡增多；2）也可能是血清差，需要更換優質血清，及時換液。
4、為什么會出現細胞表面顆粒較多的現象？
可能是培養環境有問題，可以改用中喬新舟的完全培養基（貨號：ZM0102）培養，傳三代后會恢復平整細胞表面。
5、為什么細胞狀態變差，容易漂？
1）可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開
2）也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代，并不是細胞長滿才傳代，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應該就要傳代了。
【注意事項】
1) H9c2(2-1)細胞胞體上有黑色顆粒屬于正�，F象。該細胞對胎牛血清比較敏感，建議使用高質量胎牛血清或購買我司配套完全培養液。
2) 該細胞需要再密度達到60-70%左右進行傳代，過高密度傳代會導致細胞融合形成肌管，導致細胞不增長。如果血清質量不好或血清濃度降低，融合會更快產生。
3) 經過長期的培養，細胞的增殖速度會減慢。這是由于該細胞對培養基的酸堿、血清等及其敏感，一旦細胞融合后就會增殖緩慢，需要定期從新克隆篩選成肌細胞。
細胞接種密度推薦1X10的4次方每平方厘米。
4) 消化時間的把控也是必不可少的一個步驟,防止未充分消化分散的細胞融合導致成肌管細胞的形成。
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