抗豬圓環(huán)病毒3型單克隆抗體的特性、單克隆抗體制備、抗體特性及應(yīng)用
一、豬圓環(huán)病毒 3 型（PCV3）的基本特性
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- 無囊膜，正二十面體對稱，直徑約 17-20 nm；
- 基因組為單鏈環(huán)狀 DNA，全長約 2.0 kb，編碼兩個主要結(jié)構(gòu)蛋白：
- Cap 蛋白（衣殼蛋白）：由 ORF2 基因編碼，是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白和免疫原性蛋白，負(fù)責(zé)病毒顆粒組裝，含主要抗原表位，是單克隆抗體制備的核心靶點；
- Rep 蛋白（復(fù)制相關(guān)蛋白）：由 ORF1 基因編碼，參與病毒 DNA 復(fù)制，免疫原性較弱，較少作為抗體靶點。
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- 常用重組 Cap 蛋白（通過原核表達(dá)系統(tǒng)如大腸桿菌、真核表達(dá)系統(tǒng)如昆蟲細(xì)胞表達(dá)）作為免疫原，純度需達(dá) 90% 以上；
- 也可使用滅活的 PCV3 病毒顆粒（需培養(yǎng)病毒并滅活，避免生物安全風(fēng)險），但重組蛋白因成分單一、特異性高更常用。
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- 通常選擇 BALB/c 小鼠，采用腹腔或皮下注射方式免疫：初次免疫用弗氏完全佐劑乳化抗原，加強(qiáng)免疫用弗氏不完全佐劑，間隔 2-3 周，共免疫 3-4 次；
- 末次免疫后 3-5 天，檢測小鼠血清抗體效價（通過 ELISA 或間接免疫熒光法），選擇效價高的小鼠用于細(xì)胞融合。
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- 取免疫小鼠的脾臟細(xì)胞（含 B 淋巴細(xì)胞）與骨髓瘤細(xì)胞（如 SP2/0），用聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合，獲得雜交瘤細(xì)胞；
- 通過 HAT 選擇培養(yǎng)基（篩選雜交瘤細(xì)胞，排除未融合的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞）培養(yǎng)后，采用間接 ELISA（包被重組 Cap 蛋白）或免疫熒光法（檢測與 PCV3 感染細(xì)胞的結(jié)合能力）篩選陽性克隆。
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- 對陽性雜交瘤細(xì)胞采用有限稀釋法或單細(xì)胞克隆儀進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，確保單克隆來源；
- 克隆穩(wěn)定后，通過小鼠腹腔接種或無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)收集腹水或上清，經(jīng) Protein G/A 親和層析純化，獲得高純度 mAb。
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- 抗體亞型：多為 IgG1 或 IgG2a（小鼠單克隆抗體常見亞型），少數(shù)為 IgM；
- 分子量：IgG 型抗體分子量約 150 kDa（由兩條重鏈和兩條輕鏈組成）；
- 親和力：通過 ELISA 測定的親和常數(shù)（Ka）通常在 10⁸-10¹⁰ L/mol，高親和力抗體更適合高靈敏度檢測。
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- 識別表位：多數(shù)抗 PCV3 mAb 識別 Cap 蛋白的線性表位（如 Cap 蛋白的 N 端或 C 端保守序列），少數(shù)識別構(gòu)象表位（依賴 Cap 蛋白的空間結(jié)構(gòu)）；
- 特異性：需驗證與其他 PCV 亞型（如 PCV2、PCV4）及其他豬源病毒（如豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒）無交叉反應(yīng)，確保對 PCV3 的專一性。
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- 部分 mAb 可通過中和試驗驗證是否具有病毒中和活性（抑制 PCV3 對宿主細(xì)胞的感染），這類抗體可用于病毒致病機(jī)制研究或被動免疫防控。
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- ELISA 檢測試劑盒：將 mAb 包被于酶標(biāo)板，用于檢測豬血清、組織或分泌物中的 PCV3 抗原，靈敏度可達(dá) ng 級；
- 膠體金試紙條：利用雙抗體夾心法（捕獲抗體與檢測抗體均為抗 PCV3 mAb），實現(xiàn) PCV3 的快速定性檢測，適用于基層獸醫(yī)現(xiàn)場檢測；
- 免疫組化（IHC）：通過 mAb 定位 PCV3 在感染豬組織（如淋巴結(jié)、腎臟）中的分布，輔助病理診斷。
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- 用于PCV3 的分離與鑒定（如免疫熒光法檢測病毒在細(xì)胞中的增殖）；
- 研究病毒入侵機(jī)制（通過抗體阻斷試驗分析 Cap 蛋白與宿主細(xì)胞受體的相互作用）；
- 分析 PCV3 的變異情況（通過抗體識別能力變化監(jiān)測抗原表位變異）。
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- 高中和活性的 mAb 可用于被動免疫（如給新生仔豬注射，短期預(yù)防 PCV3 感染）；
- 作為 “抗獨特型抗體” 的免疫原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗 PCV3 的保護(hù)性抗體（潛在疫苗研發(fā)方向）。
標(biāo)簽：
PCV3抗體
豬圓環(huán)3型抗體
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