SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞的培養、凍存復蘇和常見問題解答
【產品介紹】
SH-SY5Y是一種人神經母細胞瘤細胞系，是神經母細胞瘤細胞系SK-N-SH的三次克隆(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)的亞系，最初于1970年從一位4歲女孩的骨髓中分離建立的，在形態、生理、生化功能上與人體細胞相似，可以轉化為神經元樣細胞，并表現出一系列具有高度指導意義的神經生物學特性。廣泛應用于神經科學研究，包括神經退行性疾病（如帕金森病和阿爾茨海默病）、神經毒性、神經分化、基因功能研究以及信號傳導途徑研究等領域。它們可以經過特定的分化方案處理，分化為更接近于成熟神經元的細胞類型。是神經科學研究領域中的一個重要工具，它為科學家們提供了一個模擬人類神經母細胞瘤和神經元在體外條件下行為的模型。據報道，它們表現出中等水平的多巴胺β羥化酶活性。
SY5Y的生長特點為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團，少部分懸浮，圓潤有光澤。以下是中喬新舟拍攝的不同倍數的SH-SY5Y細胞圖：
4X
10X
20X
細胞名稱： SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞)
細胞別稱： SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y
細胞貨號： ZQ0050
生長特性： 混合、貼壁和懸浮（該細胞培養時貼壁細胞與懸浮細胞同時存在，均為正常形態的活細胞）。
培養條件： 43.5% MEM（含NEAA）（中喬新舟貨號：ZQ-300）+43.5% F12（中喬新舟貨號：ZQ-400） +10% FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1% 雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）+1% Sodium Pyruvate（中喬新舟貨號：CSP003）+1% L-alanyl-L-glutamine（中喬新舟貨號：CSP004）+1% NEAA (中喬新舟貨號：CSP008)；
或者：DMEM (中喬新舟貨號：ZQ-100)+10%FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）；
完全培養基貨號：ZM0050 或ZM0050-B；
培養環境：95%空氣，5%CO2；37℃
【傳代培養】
該細胞為半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞是活細胞，可用離心管收集細胞懸液后，于（125g，3 ～5分鐘）1000-1200rmp 收集細胞；部分貼壁不牢的細胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細胞可用PBS 潤洗后，在培養瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含EDTA）置于 37℃培養箱中消化，待細胞變圓收縮成流沙狀態脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養基進行終止消化，輕輕吹散細胞后離心收集細胞；將懸浮的細胞和貼壁的細胞收集到一起混勻后按比例接種到新的培養瓶。
該細胞增殖比較緩慢，容易聚團生長，鏡下觀察融合率不高，但細胞簇實際密度大，需要5-7天才能達到80%以上的融合率。
【細胞凍存】
1.細胞密度80%以上，活細胞百分率達 95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2.細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃ , 放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉移至液氮中保存。
【細胞復蘇】
1.液氮取出的細胞放入干冰中轉移到細胞房，提前準備好完全培養基，離心管。
2.凍管細胞在 37 °C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內容物轉移到含 3-6mL完全培養基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3 ～5 分鐘）1000-1200rmp去除培養基， 細胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養基混勻細胞并進行計數，用適量完全培養基將細胞密度調整至 0.6-2.0X105 ，轉移至培養瓶中，于培養箱中靜置培養。建議 T25 培養瓶添加 5-7ml 完全培養基。當密度達到 80%以上時傳代。
【常見問題】
細胞狀態差如何調整？
培養基和血清：確保使用正確的基礎培養基和加入適量血清，血清濃度可根據細胞狀態適當調整。避免使用過期或長時間存放的培養基，新鮮配制的完全培養基建議在兩周內使用完畢。
細胞培養環境：確認培養溫度、濕度、氣相條件是否正常。
細胞傳代操作：細胞傳代時，注意消化時間和胰酶濃度，避免因消化時間過長或過短導致的細胞損傷。
細胞結團如何調整？
調整細胞密度
控制接種密度：控制接種密度不要過高，以減少細胞聚集成團的機會。一般建議細胞密度達到80%左右進行傳代。
低密度傳代：可以嘗試低密度傳代，即減少每次傳代的細胞數量，這有助于細胞在培養瓶中更均勻地分布。
優化培養條件
培養基選擇：確保使用正確的SH-SY5Y細胞生長的培養基，并根據需要調整培養基的成分，如血清濃度等；
確保培養環境適宜，如穩定的溫度、濕度和CO₂濃度等。
注意消化操作
延長消化時間：如果細胞結團是由于消化不充分引起的，可以適當延長消化時間，但要避免過度消化導致細胞損傷。
輕柔吹打：在消化過程中和傳代時，用移液槍或吸管輕柔地吹打細胞懸液，以分散細胞團塊。注意吹打力度要適中，避免產生氣泡。
預防成團的方法：
1、控制細胞密度不超過80%，當密度到達或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細胞造成機械刺激。
2、使用質量好的細胞培養基和胎牛血清，減少內毒素等有害物質對細胞的刺激。
3、請勿頻繁把細胞從培養箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細胞房溫度；使用PBS、培養基前37 °C預熱，以避免溫差對細胞造成刺激。
【注意事項】
1、SH-SY5Y細胞以懸浮細胞和貼壁細胞的混合形態生長。貼壁細胞生長成具有多個短而細的細胞突起(神經突)的神經母細胞簇。細胞在生長過程中會聚集，形成團塊可能會粘附底部或漂浮。這些細胞均為活細胞。如果在培養過程中發現絕大部分細胞呈現貼壁狀態，很少有懸浮的活細胞，這是正常情況。我們建議用戶按照貼壁細胞的方式進行消化和培養。
2、如果細胞培養生長過程呈現為混合形態，細胞傳代時先將懸浮細胞離心收集。然后將貼壁細胞及聚團細胞用新鮮胰酶溶液沖洗一遍， 再加入1-2ml胰酶溶液，消化約5分鐘左右使得細胞分離變圓后加入新鮮的培養基后離心收集重懸，同時合并收集的懸浮細胞懸液，傳至新的培養瓶中。如果培養過程中發現懸浮的細胞數量比較多，或者細胞雖然為貼壁狀態但容易聚團且生長緩慢，則需要在換液和傳代時通過離心收集這些懸浮細胞，并且盡快更換高質量的血清以促進細胞貼壁和生長。
3、細胞對血清質量較為敏感，建議您使用優質胎牛血清進行培養或選擇訂購中喬新舟含配套SH-SY5Y細胞完全培養液。
4、容易聚團，消化后靜置10min去除大塊沉淀收集上清離心重鋪。
5、細胞傳代時比例不宜太高，培養密度不宜太低，一般1:2或1:3傳代較為合適，培養密度越低增殖速度越慢； 細胞生長過多時會堆在一起并逐漸脫落，需要在脫落前及時傳代；一些細胞團在傳代時需要吹散，吹打力度需適中； 細胞密度越高，培養基消耗越快，注意及時換液或傳代。
SH-SY5Y是一種人神經母細胞瘤細胞系，是神經母細胞瘤細胞系SK-N-SH的三次克隆(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)的亞系，最初于1970年從一位4歲女孩的骨髓中分離建立的，在形態、生理、生化功能上與人體細胞相似，可以轉化為神經元樣細胞，并表現出一系列具有高度指導意義的神經生物學特性。廣泛應用于神經科學研究，包括神經退行性疾病（如帕金森病和阿爾茨海默病）、神經毒性、神經分化、基因功能研究以及信號傳導途徑研究等領域。它們可以經過特定的分化方案處理，分化為更接近于成熟神經元的細胞類型。是神經科學研究領域中的一個重要工具，它為科學家們提供了一個模擬人類神經母細胞瘤和神經元在體外條件下行為的模型。據報道，它們表現出中等水平的多巴胺β羥化酶活性。
SY5Y的生長特點為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團，少部分懸浮，圓潤有光澤。以下是中喬新舟拍攝的不同倍數的SH-SY5Y細胞圖：
4X
10X
20X
細胞名稱： SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞)
細胞別稱： SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y
細胞貨號： ZQ0050
生長特性： 混合、貼壁和懸浮（該細胞培養時貼壁細胞與懸浮細胞同時存在，均為正常形態的活細胞）。
培養條件： 43.5% MEM（含NEAA）（中喬新舟貨號：ZQ-300）+43.5% F12（中喬新舟貨號：ZQ-400） +10% FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1% 雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）+1% Sodium Pyruvate（中喬新舟貨號：CSP003）+1% L-alanyl-L-glutamine（中喬新舟貨號：CSP004）+1% NEAA (中喬新舟貨號：CSP008)；
或者：DMEM (中喬新舟貨號：ZQ-100)+10%FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）；
完全培養基貨號：ZM0050 或ZM0050-B；
培養環境：95%空氣，5%CO2；37℃
【傳代培養】
該細胞為半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞是活細胞，可用離心管收集細胞懸液后，于（125g，3 ～5分鐘）1000-1200rmp 收集細胞；部分貼壁不牢的細胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細胞可用PBS 潤洗后，在培養瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含EDTA）置于 37℃培養箱中消化，待細胞變圓收縮成流沙狀態脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養基進行終止消化，輕輕吹散細胞后離心收集細胞；將懸浮的細胞和貼壁的細胞收集到一起混勻后按比例接種到新的培養瓶。
該細胞增殖比較緩慢，容易聚團生長，鏡下觀察融合率不高，但細胞簇實際密度大，需要5-7天才能達到80%以上的融合率。
【細胞凍存】
1.細胞密度80%以上，活細胞百分率達 95%以上時，將細胞按照以上步驟進行消化收集細胞沉淀進行凍存。
2.細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃ , 放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉移至液氮中保存。
【細胞復蘇】
1.液氮取出的細胞放入干冰中轉移到細胞房，提前準備好完全培養基，離心管。
2.凍管細胞在 37 °C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內容物轉移到含 3-6mL完全培養基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3 ～5 分鐘）1000-1200rmp去除培養基， 細胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養基混勻細胞并進行計數，用適量完全培養基將細胞密度調整至 0.6-2.0X105 ，轉移至培養瓶中，于培養箱中靜置培養。建議 T25 培養瓶添加 5-7ml 完全培養基。當密度達到 80%以上時傳代。
【常見問題】
細胞狀態差如何調整？
培養基和血清：確保使用正確的基礎培養基和加入適量血清，血清濃度可根據細胞狀態適當調整。避免使用過期或長時間存放的培養基，新鮮配制的完全培養基建議在兩周內使用完畢。
細胞培養環境：確認培養溫度、濕度、氣相條件是否正常。
細胞傳代操作：細胞傳代時，注意消化時間和胰酶濃度，避免因消化時間過長或過短導致的細胞損傷。
細胞結團如何調整？
調整細胞密度
控制接種密度：控制接種密度不要過高，以減少細胞聚集成團的機會。一般建議細胞密度達到80%左右進行傳代。
低密度傳代：可以嘗試低密度傳代，即減少每次傳代的細胞數量，這有助于細胞在培養瓶中更均勻地分布。
優化培養條件
培養基選擇：確保使用正確的SH-SY5Y細胞生長的培養基，并根據需要調整培養基的成分，如血清濃度等；
確保培養環境適宜，如穩定的溫度、濕度和CO₂濃度等。
注意消化操作
延長消化時間：如果細胞結團是由于消化不充分引起的，可以適當延長消化時間，但要避免過度消化導致細胞損傷。
輕柔吹打：在消化過程中和傳代時，用移液槍或吸管輕柔地吹打細胞懸液，以分散細胞團塊。注意吹打力度要適中，避免產生氣泡。
預防成團的方法：
1、控制細胞密度不超過80%，當密度到達或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細胞造成機械刺激。
2、使用質量好的細胞培養基和胎牛血清，減少內毒素等有害物質對細胞的刺激。
3、請勿頻繁把細胞從培養箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細胞房溫度；使用PBS、培養基前37 °C預熱，以避免溫差對細胞造成刺激。
【注意事項】
1、SH-SY5Y細胞以懸浮細胞和貼壁細胞的混合形態生長。貼壁細胞生長成具有多個短而細的細胞突起(神經突)的神經母細胞簇。細胞在生長過程中會聚集，形成團塊可能會粘附底部或漂浮。這些細胞均為活細胞。如果在培養過程中發現絕大部分細胞呈現貼壁狀態，很少有懸浮的活細胞，這是正常情況。我們建議用戶按照貼壁細胞的方式進行消化和培養。
2、如果細胞培養生長過程呈現為混合形態，細胞傳代時先將懸浮細胞離心收集。然后將貼壁細胞及聚團細胞用新鮮胰酶溶液沖洗一遍， 再加入1-2ml胰酶溶液，消化約5分鐘左右使得細胞分離變圓后加入新鮮的培養基后離心收集重懸，同時合并收集的懸浮細胞懸液，傳至新的培養瓶中。如果培養過程中發現懸浮的細胞數量比較多，或者細胞雖然為貼壁狀態但容易聚團且生長緩慢，則需要在換液和傳代時通過離心收集這些懸浮細胞，并且盡快更換高質量的血清以促進細胞貼壁和生長。
3、細胞對血清質量較為敏感，建議您使用優質胎牛血清進行培養或選擇訂購中喬新舟含配套SH-SY5Y細胞完全培養液。
4、容易聚團，消化后靜置10min去除大塊沉淀收集上清離心重鋪。
5、細胞傳代時比例不宜太高，培養密度不宜太低，一般1:2或1:3傳代較為合適，培養密度越低增殖速度越慢； 細胞生長過多時會堆在一起并逐漸脫落，需要在脫落前及時傳代；一些細胞團在傳代時需要吹散，吹打力度需適中； 細胞密度越高，培養基消耗越快，注意及時換液或傳代。
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