抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體的制備
抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體相關參數解析
一、TGEV 毒株型號區別 二、單克隆抗體制備流程 1. 抗原制備
1. 抗原識別特異性
一、TGEV 毒株型號區別 二、單克隆抗體制備流程 1. 抗原制備
- 抗原類型：
- 全病毒抗原（滅活或純化 TGEV，如 Purdue-115 株）：誘導廣譜抗體，但需生物安全防護（BSL-2 實驗室）。
- 重組蛋白抗原（如 S 蛋白 RBD 區、N 蛋白）：安全性高，抗原表位明確，常用于特異性抗體篩選。
- 免疫方案：
- 動物模型：BALB/c 小鼠（6-8 周齡），腹腔注射抗原（10-50 μg / 次），佐劑（弗氏完全 / 不完全佐劑）輔助。
- 免疫周期：3-4 次基礎免疫（間隔 2 周）+ 1 次加強免疫（融合前 3 天靜脈注射）。
- 融合步驟：
- 脾細胞（免疫小鼠）與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）按 5:1 比例混合，PEG1500 誘導融合。
- 篩選培養基：HAT 培養基（含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），淘汰未融合細胞。
- 抗體篩選：
- 間接 ELISA：以 TGEV 抗原包被，篩選陽性雜交瘤細胞株。
- 中和試驗（Neutralization Assay）：檢測抗體對 TGEV 感染的中和能力（如 TCID₅₀抑制率）。
- 毒株交叉反應性測試：用不同型毒株（如經典株、變異株）驗證抗體特異性。
- 有限稀釋法：將雜交瘤細胞稀釋至 0.5 細胞 / 孔，單克隆培養，確保單一抗體來源。
- 抗體生產：
- 小鼠腹腔誘生法：注射雜交瘤細胞，收集腹水，抗體濃度可達 1-10 mg/mL。
- 懸浮培養法：無血清培養基大規模培養，適合工業化生產，抗體純度高（需親和層析純化）。
1. 抗原識別特異性
- 表位類型：
- 中和表位：主要位于 S 蛋白 RBD 區（如氨基酸殘基 380-440），抗體可阻斷病毒與宿主細胞受體（氨肽酶 N）結合。
- 非中和表位：常見于 N 蛋白、M 蛋白，用于病毒檢測（如 ELISA、免疫熒光），但無中和活性。
- 毒株交叉反應性：
- 經典株抗體（如針對 Purdue-115 S 蛋白）對變異株（如 TH-98）中和效率可能下降 50% 以上。
- 新型變異株抗體（如針對 China-2012 S 蛋白）需通過中和試驗驗證對不同毒株的交叉保護力。
- 中和效價（IC₅₀）：
- 指抑制 50% 病毒感染所需的抗體濃度，經典株抗體 IC₅₀通常為 0.1-1 μg/mL，變異株抗體可能需更高濃度（如 1-10 μg/mL）。
- 抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC）：
- 部分抗體可通過 Fc 段激活 NK 細胞，增強對病毒感染細胞的殺傷，需通過流式細胞術檢測。
- 診斷用抗體：需高親和力（KD 值＜10⁻⁹ M），識別保守表位（如 N 蛋白），避免毒株變異導致假陰性。
- 治療用抗體：需同時具備高中和活性和廣譜毒株覆蓋能力，優先選擇針對 S 蛋白保守區的抗體。
- 生物安全：TGEV 活病毒操作需在 BSL-2 實驗室進行，滅活抗原需驗證病毒失活（如 TCID₅₀檢測）。
- 毒株代表性：制備廣譜抗體時，需用多種流行毒株（如經典株 + 變異株）免疫動物，或通過噬菌體展示技術篩選跨毒株表位。
- 抗體穩定性：純化后的單克隆抗體需檢測熱穩定性（如 4℃、-20℃保存效期）和凍融穩定性（3 次循環后活性≥80%）。
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