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多重qPCR核心特點、優勢及應用領域的介紹

瀏覽次數:265 發布日期:2025-6-18  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
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什么是多重qPCR
多重qPCR是實時熒光定量PCR技術的一種高級形式。它是在同一個PCR反應體系中,同時使用多對引物和多個特異性的探針(或染料),針對兩個或兩個以上的不同目標核酸序列(靶基因)進行擴增和實時定量檢測。簡單來說,就是“一管反應,多個目標”。

 

多重qPCR核心特點與優勢
  1. 并行檢測:同時檢測多個靶標。
  2. 節省樣本:對珍貴或有限的樣本(如臨床活檢、稀有細胞)特別有價值。
  3. 節省試劑與時間:比進行多個單重qPCR反應顯著減少試劑消耗和操作時間。
  4. 節省成本:降低了每個靶標檢測的成本。
  5. 減少誤差:所有靶標在完全相同的反應條件下進行擴增,減少了管間差異帶來的誤差,結果可比性更高。
  6. 提高通量:非常適合高通量篩查和需要同時檢測多個指標的應用(如病原體分型、多基因表達分析、SNP分型等)。
  7. 內參共檢:可以輕松地將內參基因與目標基因放在同一個反應中進行檢測,提高定量的準確性。

多重qPCR主要應用領域
  • 病原體檢測與分型(如同時檢測多種病毒、細菌或耐藥基因)
  • 基因表達分析(同時檢測多個功能相關基因或通路基因)
  • 基因分型(如SNP、插入/缺失檢測)
  • 轉基因檢測(同時檢測多個轉基因元件或品系特異性標記)
  • 拷貝數變異分析
  • 食品安全檢測(同時檢測多種過敏原或污染物)

多重qPCR主要類型
多重qPCR主要根據所使用的化學發光方法來分類,主要包括:
  • 水解探針法:最常用,高特異高靈敏,多重能力取決于通道數。
  • 染料法:成本最低,但特異性低,多重能力有限(依賴Tm差異)。
  • 分子信標法:背景低,對點突變鑒別強,設計復雜。
  • Scorpions法:速度快靈敏度高,設計最復雜成本最高。
在實際應用中,基于水解探針的多重qPCR因其良好的平衡性(特異性、靈敏度、多重能力、相對成熟度)而成為絕對的主流。染料法主要用于靶標少且Tm差異明顯、對成本敏感的非關鍵應用。分子信標和Scorpions則在特定需求場景下使用。

QX系列實時熒光定量PCR系統
杰萊美QX系列實時熒光定量PCR系統最大可實現單管6重熒光檢測,6通道96孔檢測時間不超過5秒,實現對珍貴樣本最大限度的利用和數據挖掘。另外搭配業界領先的熒光定量PCR數據處理軟件,QX系列將熒光信號處理、專業的數據計算方法、嚴謹的統計學分析功能整合為一站式解決方案,從核酸到蛋白研究,滿足探索各種科學問題的實驗需要,重新定義了科研級熒光定量PCR系統。

 
 
基于杰萊美QX系列實時熒光定量PCR系統,設計了六重qPCR實驗,首先通過執行DNA系列稀釋(最低濃度為100cp/uL),對6個靶標基因進行梯度檢測,繪制出如下的標準曲線。如圖所示,每個靶標的反應都顯示出極好的擴增效率,E值在接近100%的范圍內,且R2值均大于0.99,接近1。這些結果證明了QX系列實時熒光定量PCR系統具有卓越的檢測性能,支持6靶標的精準檢測,可為您的實驗提供最大限度的靈活性。
 




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