GL261細胞培養傳代步驟及常見問題解決方案
細胞簡介
GL261細胞是于1939年通過將3-甲基膽蒽顱內注射到C57BL/6小鼠中誘導產生的大腦膠質瘤細胞，在20世紀90年代中期從Gl261腫瘤中建立體外生長細胞。文獻報道GL261細胞攜帶TP53和KRAS突變。
細胞信息
細胞名稱：glioma261小鼠神經膠質瘤細胞
別稱：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生長特性：成纖維細胞樣、貼壁生長
倍增時間：~100-120小時（DSMZ=ACC-802）
細胞培養條件：DMEM（高糖）基礎培養基（貨號：ZQ-100）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%ps（貨號：CSP006）
溫度：37℃
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）
細胞特性：該細胞生長緩慢、培養過程中有漂浮細胞。
傳代步驟
吸液：吸出原培養液;
潤洗：加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞;
消化：放入培養箱消化，顯微鏡下看到細胞回縮細胞變圓、有明顯間隙（約2-4min），輕輕晃動培養培養瓶（皿），細胞大部分脫落時直到80%脫落可終止，加入3-5mL含血清的培養基終止消化，吹打細胞3-8下培養瓶使細胞全部脫落；
離心：收集細胞懸液到離心管進行離心，1000rpm/min 5分鐘，離心完吸出上清丟棄；
加培養基：加入新鮮培養基，按比例接種到新培養瓶，補足培養基，畫8字法混勻細胞，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋，將培養瓶放回培養箱靜置培養，后續觀察細胞生長情況。
常見問題
1、當你的細胞收到是如下狀態時，該如何處理?
運輸會導致該細胞皺縮，脫落、聚集等情況，當收到細胞皺縮、脫落時，可以先噴酒精，擦拭干凈細胞瓶表面。放入培養箱靜止2-4h,一般靜置后細胞會恢復，細胞會再次貼壁。在密度沒有達到80%的時候可以把培養基吸出。添加完全培養基繼續培養，次日觀察。當細胞密度有80%以上且部分細胞堆積時，可按照上面步驟進行傳代，一般傳代后細胞會恢復。
2、培養過程中有碎片、黑點變多、液體變濃稠
GL261細胞具有達爾頓抗原neu轉化基因，p815蛋白質與膠質母細胞瘤密切相關，p185與表皮生長因子受體在血清受體血學上相似，具有分泌功能，分泌物質是濃稠的1.1、所以細胞培養過程中培養基會變濃稠，換液時能明顯感受到液體會有拉絲的情況，特別是細胞密度高換液時候較明顯。
2.1細胞凋亡后會產生一些分泌物的沉積和碎片物質，在顯微鏡下呈黑點狀。屬于正常現象；
2.2 該細胞生長過程中，培養基中始終有少量漂浮的細胞及碎片，背景中可看到少量黑點，換液可暫時改善，但繼續培養漂浮細胞仍會出現。這是細胞特性無法避免。以上都是常見現象，不影響細胞增殖和實驗；
3、生長緩慢
細胞生長偏慢時，可以提高5-10%血清濃度（血清總濃度不超過 20%）培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回正常血清濃度。
4、漂浮細胞太多
該細胞貼壁展開較慢，個體較大，復蘇、傳代24h后大部分細胞呈不規則多邊形或圓形，細胞形態未完全展開，此時不用換液處理，48h后可見細胞開始成片聚集生長；新復蘇培養細胞，可見較多漂浮，復蘇48h內可先不換液，保留漂浮細胞繼續貼壁；如果傳代后貼壁細胞少，或貼壁不牢固，可購買纖連蛋白或多聚賴氨酸包被培養瓶輔助細胞貼壁。
消化傳代時，把控好消化時間。吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免造成細胞碎裂增多。
GL261細胞是于1939年通過將3-甲基膽蒽顱內注射到C57BL/6小鼠中誘導產生的大腦膠質瘤細胞，在20世紀90年代中期從Gl261腫瘤中建立體外生長細胞。文獻報道GL261細胞攜帶TP53和KRAS突變。
細胞信息
細胞名稱：glioma261小鼠神經膠質瘤細胞
別稱：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生長特性：成纖維細胞樣、貼壁生長
倍增時間：~100-120小時（DSMZ=ACC-802）
細胞培養條件：DMEM（高糖）基礎培養基（貨號：ZQ-100）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%ps（貨號：CSP006）
溫度：37℃
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）
細胞特性：該細胞生長緩慢、培養過程中有漂浮細胞。
傳代步驟
吸液：吸出原培養液;
潤洗：加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞;
消化：放入培養箱消化，顯微鏡下看到細胞回縮細胞變圓、有明顯間隙（約2-4min），輕輕晃動培養培養瓶（皿），細胞大部分脫落時直到80%脫落可終止，加入3-5mL含血清的培養基終止消化，吹打細胞3-8下培養瓶使細胞全部脫落；
離心：收集細胞懸液到離心管進行離心，1000rpm/min 5分鐘，離心完吸出上清丟棄；
加培養基：加入新鮮培養基，按比例接種到新培養瓶，補足培養基，畫8字法混勻細胞，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋，將培養瓶放回培養箱靜置培養，后續觀察細胞生長情況。
常見問題
1、當你的細胞收到是如下狀態時，該如何處理?
運輸會導致該細胞皺縮，脫落、聚集等情況，當收到細胞皺縮、脫落時，可以先噴酒精，擦拭干凈細胞瓶表面。放入培養箱靜止2-4h,一般靜置后細胞會恢復，細胞會再次貼壁。在密度沒有達到80%的時候可以把培養基吸出。添加完全培養基繼續培養，次日觀察。當細胞密度有80%以上且部分細胞堆積時，可按照上面步驟進行傳代，一般傳代后細胞會恢復。
2、培養過程中有碎片、黑點變多、液體變濃稠
GL261細胞具有達爾頓抗原neu轉化基因，p815蛋白質與膠質母細胞瘤密切相關，p185與表皮生長因子受體在血清受體血學上相似，具有分泌功能，分泌物質是濃稠的1.1、所以細胞培養過程中培養基會變濃稠，換液時能明顯感受到液體會有拉絲的情況，特別是細胞密度高換液時候較明顯。
2.1細胞凋亡后會產生一些分泌物的沉積和碎片物質，在顯微鏡下呈黑點狀。屬于正常現象；
2.2 該細胞生長過程中，培養基中始終有少量漂浮的細胞及碎片，背景中可看到少量黑點，換液可暫時改善，但繼續培養漂浮細胞仍會出現。這是細胞特性無法避免。以上都是常見現象，不影響細胞增殖和實驗；
3、生長緩慢
細胞生長偏慢時，可以提高5-10%血清濃度（血清總濃度不超過 20%）培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回正常血清濃度。
4、漂浮細胞太多
該細胞貼壁展開較慢，個體較大，復蘇、傳代24h后大部分細胞呈不規則多邊形或圓形，細胞形態未完全展開，此時不用換液處理，48h后可見細胞開始成片聚集生長；新復蘇培養細胞，可見較多漂浮，復蘇48h內可先不換液，保留漂浮細胞繼續貼壁；如果傳代后貼壁細胞少，或貼壁不牢固，可購買纖連蛋白或多聚賴氨酸包被培養瓶輔助細胞貼壁。
消化傳代時，把控好消化時間。吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免造成細胞碎裂增多。
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