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人臍靜脈內皮細胞HUVEC培養過程中出現的問題及解決方法

瀏覽次數:2269 發布日期:2023-1-13  來源:absin

人臍靜脈內皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)是臍靜脈的重要構成細胞之一。當進行血管內皮細胞實驗時,通常使用人臍靜脈內皮細胞,而非靜脈內皮細胞或動脈內皮細胞。永生化的HUVEC會通過慢病毒轉染的方式攜帶RFP基因或GFP基因。
 

表1 HUVEC細胞基本信息 

名稱

HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)

形態

上皮樣

生長特性

貼壁

接種密度

8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2

傳代比率

1:2-1:3



圖1 HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)

 

首先要討論的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”?
通常來說,HUVEC的“胃口”還是蠻“刁”的,營養需求很高,除了營養種類豐富的F12和必不可少的胎牛血清(如表2所示),肝素和血管內皮生長因子也是必須的。如圖2所示,長勢良好的HUVEC呈鵝卵石樣,輪廓清晰,鋪展均勻,一般2-3天可傳代。

 

表2 為HUVEC精心準備的“食譜”

營養

含量

  F12

90%

胎牛血清

10%

肝素

終濃度0.1mg/ml

ECGS血管內皮生長因子

0.03-0.05ug/ml

雙抗

1%



圖2 長勢良好的HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)

 

其次要討論一下為啥頭天換液,第二天HUVEC無限細胞系突然出現空泡化?
如圖3所示,嚴重空空泡化的HUVEC。這里要注意的是有限細胞系的空泡化往往是細胞凋亡的顯著特征,與細胞本身狀態有關。而無限細胞系空泡化通常與外界因素有管,有以下兩種可能: 第一點是培養液的pH值與細胞正常所需pH值差別太大,導致細胞代謝異常,出現空泡化;第二點是在細胞培養過程中,由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導致細胞代謝出現問題,內質網應激狀況下會出現細胞空泡化的情況。

 


圖3 空泡化的HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)

 

解決細胞空泡化,通常有兩種方法:
1. 測定完培的pH,看其酸堿性是否適宜。多數細胞適宜的pH范圍為7.2-7.4。
2. 若培基或血清是開封存放很久的,可換用新鮮的完配給細胞換液;若都是新開封的,可換用新批次的基培或血配制培養液,給細胞換液觀察。

 

最后要討論的是如何解決HUVEC聚團問題,培養瓶尤其是培養板的親水性較差時或血清中的促貼壁因子不足時,會導致HUVEC細胞聚團問題。
解決辦法:培養瓶前一天用明膠(abs47051214)包被可有效預防HUVEC聚團。包被方法:以 T25 培養瓶為例,取5ml的明膠,加入培養瓶, 放置37℃條件下至少30分鐘,然后用槍頭將液體吸出即可。如圖示4所示,是鋪展均勻的HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)。

 


圖4 正常貼壁,伸展均勻的HUVEC(人臍靜脈內皮細胞)

發布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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