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針對工藝強化、集成平臺上徑向流色譜法在抗體純化中的應用

瀏覽次數:1914 發布日期:2022-12-1  來源:艾貝泰

Roger Alsop,1,2 Salah Ahmed ,1 Cindy Chuah ,1 and Vinit Saxena1

Sepragen Corporation , 33470 Western Ave, Union City, CA. 94587

2 ralsop@sepragen.com

 摘要
徑向流色譜(RFC)(Fig1)是一種經過驗證的快速、低壓色譜技術,對蛋白質的快速純化非常有效。RFC柱的設計使它適用于所有規模(實驗室,中試或生產級別)的高通量吸附分離,另外它支持所有市場上的商用樹脂。RFC的設計支持穩定的“快速”吸附分離,易于適應全新的工藝強化/集成平臺。
 

 

本研究采用徑向流色譜技術,使用一種市售Protein A樹脂對重組人源IgG1(CHO細胞系培養)進行純化,通過對負載能力,流量的影響和超載條件的探索,對其數據進行展示及可能實現的工藝強化/集成平臺進行討論。

 

01方法

實驗材料

1) 收獲澄清的IgG1(pH ~7, 1.3-1.5 mg/mL)

Sepragen QuantaSep系統:

2) QuantaSep1000LX 純化設備(Fig3)
 


 

3) 商用Protein A樹脂,動態載量~30 mg/mL

4) 2.5 cm床深(100 mL)徑向流柱(Fig2)

5) 平衡/洗滌緩沖液:25 mM Tris(pH 6-7)

6) 洗脫緩沖液:10 mM Glycine(pH 3.5)

7) 再生緩沖液:50 mM NaOH

 

02運行

100 mL SuperFlo徑向流柱(填充載量30 mg/mL的市售Protein A)

純化平臺:Sepragen QuantaSep純化系統(Fig3)
 

 03色譜程序與圖譜
 


 

 04純化篩選

實驗從合作公司獲得的澄清IgG1開始,考察了在流量略有變化情況下的負載能力,一段時間后對收獲的樣品進行過濾,未觀察到降解沉淀現象。

實驗結果見色譜圖(Fig4),數據匯總見Table 2。
 


 

 05對結果進行討論并將RFC實現工藝強化/集成

為了提高生產力同時縮短工藝周期,工藝集成化和一體化是生物技術產業的趨勢。在工藝強化和集成系統中,徑向流柱(RFC)與傳統軸向流柱相比,可以減少生產周期(Table 3)

  • 與軸向流柱推薦的(按照樹脂制造規格)300 cm/hr(75 L/hr)的流速相比,RFC支持更高的流速(150 L/hr)。即使采用更高的理論速率500cm /hr,軸向流柱也只能達到124 L /hr。
  • RFC的設計可以降低柱壓1.,靈活的完成負載循環,解決更多不穩定樣品的負載問題。

 

徑向流柱支持多柱滑行純化系統在較低的壓力下以較高的流速運行,是一個更具有成本效益的過程。此外,RFC支持任何市售樹脂,在開發的工作完成后,樹脂可快速轉移到RFC平臺2.



將本研究中獲得的RFC流量與軸向柱理論高流量300/500 cm/hr進行比較,徑向流柱過程更快,而更快的速度將減少操作時間
 


 

 06結論

徑向流色譜法是抗體純化和工藝強化平臺的一個重要選擇。

它支持:

!高流速 !高回收率(防止樣品沉淀降解)大大減少純化工作時長

  • 在這項小型抗體純化研究中,我們在22-30 cv/hr的三個高范圍內獲得了90+%的高回收率
  • 流速明顯高于傳統軸向流柱
  • 支持使用任何市售樹脂
  • 低柱壓下的高流量

 

參考文獻

1) Comparison of Radial and Axial Flow Chromatography for Monoclonal Antibody Downstream Processing at Bench and Pilot Scales American Journal of Biochemistry and Biotechnology, 2012, 8 (4), 255-262 2) Sepragen website leaning center

發布者:廣州市艾貝泰生物科技有限公司
聯系電話:400-8816-128
E-mail:carrie@applitechbio.com

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