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細菌內毒素(脂多糖)的純化方法

瀏覽次數:1415 發布日期:2022-9-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

脂多糖Lipopoly saccharide,LPS是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分,脂多糖對宿主是有毒性的。脂多糖只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來,所以叫做內毒素。

三氯醋酸法(Trichloroacetic Acid,TCA)、酚水法苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP)、DMSO法高壓超聲處理法所提取的LPS或多或少受到蛋白質、核酸及多糖的污染,故需作一定的純化。LPS的純化方法目前最常用的為超速離心(4萬轉×4小時,共三次),在這一條件下,LPS可沉淀下去,而蛋白質、核酸及多糖則保留在上清液中,去除上清液即可得到較為純化的LPS。

 


 

但是這一方法需時較長,且質量過關的超速離心機目前在國內亦不十分普及,故而難以推廣應用。我們在實際工作中體會到,用任何方法提取的LPS,可再以PCP純化一次(140ml/g LPS),然后只需一次超離,即可取得高度純化的LPS。

提取的LPS除可被蛋白質、核酸及多糖污染外,還可被一些小分子物質,如多胺、陽離子(Ca++、Mg++、K+等)的污染。通過電透析可將這類小分子物質除去。此時形成的LPS為酸性LPS(由LPS中類脂A上的磷酸基團形成的)。應用堿中和LPS,可變成LPS的鹽。如用NaOH中和則可變成LPS鈉鹽,而應用三乙基乙胺則可變成LPS三乙胺鹽、后者極易溶解于水,已廣泛地應用于生物學研究。

綜上所述,LPS提取方法較多,應當根據菌種和實驗條件而選用合適方法。PCP法對R型菌尤顯長處高壓超聲法雖可用于S或R菌但方法步驟繁雜DMSO法與TCA法已很少用到而酚水法無論產量,純度及物理性質均較滿意的,不失為一個實用的方法。LPS純化目前一般采用PCP法及一次超速離心,應用該法可使LPS污染物包括蛋白質、核酸及多糖除去,而應用片透析方法,則可除去LPS中的小分子物質如多胺、二價陽離子,從而可得LPS轉化成實驗需要的鹽類。

發布者:科德角國際生物醫學科技(北京)有限公司
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