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天信和固定床生物反應器貼壁細胞培養操作指南

瀏覽次數:3655 發布日期:2022-3-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
     固定床生物反應器由于其剪切力低、操作穩定,便于控制等優點被廣泛地應用于貼壁細胞的培養。使用天信和Cellcomb載體在固定床生物反應器中培養細胞,可延長培養過程中連續灌流的時間,提高生產率,輕松實現細胞的高密度大規模培養。

    下面為大家詳解天信和固定床生物反應器貼壁細胞培養操作步驟,以便您更好地理解貼壁細胞的操作過程。


操作步驟詳解
 

一、清洗固定床生物反應器

1. 擰掉頂蓋上的密封螺絲,取出罐體頂蓋和固定籃;

2. 用純化水沖洗玻璃罐內外壁和法蘭盤;

3. 用柔軟紗布擦洗罐體內部;

4. 反復沖洗固定篩片、套管、深層通氣管等;

5. 用柔軟紗布擦洗電極、槳葉等所有組件;

6. 用注射用水沖洗罐體內外壁和所有組件。
 

二、安裝固定床生物反應器

1. 倒入已經完全膨脹、濕潤的Cellcomb載體;

2. Cellcomb載體分布均勻后,下調固定籃上篩片,然后擰緊固定螺絲;

3. 倒入pH為7.4左右的PBS溶液清洗1次;

4. 再次倒入PBS溶液沒過載體、電極;

5. 安裝好頂蓋并擰緊螺絲;

6. 安裝工藝軟管并用止血鉗夾緊軟管;

7. 氣密性檢查:通入壓縮空氣,罐內壓力升到0.5bar左右,停止通氣并夾緊進氣軟管,放置6h檢查罐體內的氣壓,6h后壓力表沒有變化,則表示氣密性良好;

8. 高壓滅菌:打開尾氣、表層進氣管路上止血鉗,將罐體及所有組件進行高壓滅菌,滅菌程序為敞口液體程序121℃,45分鐘;

9. 滅菌結束后取出罐體,并放置至室溫;

10. 將反應器罐體與控制器連接,連接溫度、DO、pH、加熱毯、攪拌電機等;

11. 在無菌環境下將反應器與廢液桶、培養液桶、接種瓶等連接;

12. 接入壓縮空氣,將反應器罐內PBS通過管路排至廢液桶,用細胞培養液清洗載體2次;

13. 再次加入細胞培養液,沒過攪拌槳葉、pH電極等,調整反應器參數,進行細胞預培養。
 

三、細胞貼壁培養

1. 接入待培養的動物細胞;

2. 將溫度設置為37℃,溶氧為40%,pH值為7.0左右進行細胞培養;

3. 每24小時在線取樣一次,進行生化檢測和pH值測量;

溫馨提示:共取兩管樣品,第一管廢棄,只保留第二管樣品;液體單向流動,只出不進。

4. 取樣后將取樣管末端浸入75%的酒精。

溫馨提示:每24小時或每次操作都需填寫生物反應器操作記錄
 

四、下罐操作

1. 關掉控制面板上的所有的自動控制,只保留攪拌功能;

2. 用止血鉗夾住深層進氣和尾氣出氣,開啟表層進氣,并調節進氣流量;

3. 拆掉加熱毯,關掉攪拌功能,松開進氣管道;

4. 將罐內培養液排入廢液桶;

5. 排液完成后,夾緊進氣管道和排液管道;

6. 斷開電極與控制柜的連接,拆掉所有管路和附件;

7. 拆掉頂蓋螺絲,打開頂蓋,擰掉固定籃上的螺絲,取出上篩片;

8. 取樣:分別在上層、中層及下層各取0.5g Cellcomb載體樣品;

9. 在Cellcomb載體樣品中加入10ml結晶紫,將加入結晶紫的載體樣品放入搖床中(過夜后進行細胞計數);

10. 用純化水反復沖洗反應器固定篩片,并用柔軟紗布擦洗,仔細沖洗、擦拭罐體內外壁、漿葉及其他組件;

11. 清洗完成后擰上頂蓋螺絲,罐體內裝滿0.1M的氫氧化鈉浸泡過夜。

五、細胞計數

過夜后對Cellcomb載體樣品進行細胞計數:

1. 從搖床中取出載體樣品并充分搖晃;

2. 在EP管內加入PBS溶液,將樣品移入EP管中進行稀釋;

3. 用移液槍反復吹打細胞懸液;

4. 將稀釋后的細胞懸液打在細胞計數板上;

5. 在顯微鏡下進行細胞計數。


觀看操作視頻

請關注微信公眾號“天信和生物”,回復“固定床”即可查看詳細的固定床生物反應器貼壁細胞培養操作視頻。


 

中生天信和——國藥集團·中國生物旗下子公司,致力于為中國生物制藥產業提供領先的生物制藥過程支撐技術,提升中國生物制藥上游原材料以及裝備的自主可控能力,加快生物制藥產業發展。
 

【核心優勢業務】

個性化細胞培養基開發與生產

生物反應器自主設計與制造

生物制藥過程工藝技術開發


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