九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞遺傳學(xué)分析中淋巴細(xì)胞微核測定方法介紹

細(xì)胞遺傳學(xué)分析中淋巴細(xì)胞微核測定方法介紹

瀏覽次數(shù):1318 發(fā)布日期:2022-1-13  來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
淋巴細(xì)胞微核測定是細(xì)胞遺傳學(xué)分析中常用的方法之一,通過微核率的高低可以有效判斷染色體畸變率與輻射損傷。 

一、淋巴細(xì)胞分離 
分離使用Ficoll-Paque密度梯度分離淋巴細(xì)胞。將血液用磷酸鹽緩沖鹽水按 1:1 稀釋,并在 Ficoll-Paque 上分層,血液 + PBS: Ficoll 的比例保持為 4:3。血液在室溫下以 1800 rpm 離心 35 分鐘。去除淋巴細(xì)胞層(血沉棕黃層)并在 PBS 中以 1200 rpm 洗滌兩次,每次 10 分鐘,然后用培養(yǎng)基 RPMI 1640 洗滌。用血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞密度。

二、培養(yǎng)條件
淋巴細(xì)胞在 15 ml 錐形聚苯乙烯離心管中的 5% CO2 加濕培養(yǎng)箱中于 37o 培養(yǎng)。通常,每個培養(yǎng)物由 2 毫升培養(yǎng)基中的 1x10 6 個細(xì)胞的初始密度組成。培養(yǎng)基由補充有 10% 胎牛血清 2mM L-谷氨酰胺、100 單位/ml 青霉素、100 ug/ml 鏈霉素和 1.5% 植物血凝素的 RPMI 1640 組成。
在起始后 44 小時將微核測定細(xì)胞松弛素 B 加入到培養(yǎng)物中。細(xì)胞松弛素 B 阻止細(xì)胞完成胞質(zhì)分裂,導(dǎo)致多核細(xì)胞的形成。細(xì)胞培養(yǎng)物中細(xì)胞松弛素 B 的最終濃度為 3 mg/ml。

在培養(yǎng)開始后 72 小時,使用細(xì)胞離心機 (Shandon, Sewickley, PA) 將淋巴細(xì)胞直接離心到載玻片上。然后將細(xì)胞以 600 rpm 的速度旋轉(zhuǎn)到載玻片上 10 分鐘。在室溫下甲醇固定 15 分鐘之前,讓載玻片風(fēng)干。載玻片在-20℃ 下儲存在密封盒中,在 N2 下干燥。

三、細(xì)胞染色與微核測定
染色:將甲醇固定的載玻片在含有 0.1% Tween 20 的 PBS 中孵育 5 分鐘。從載玻片中排出多余的液體,并用含有 0.2% Tween 20 的 PBS 1:1 稀釋 40-50 ul 抗動粒抗體應(yīng)用% Tween 20。然后將載玻片蓋上蓋玻片并置于 37oC 的加濕室中 1 小時。在含有 0.1% Tween 20 的 PBS 中洗滌兩次,每次 5 分鐘后,再次排出多余的液體,用 1:50 稀釋的熒光山羊抗人 IgG覆蓋載玻片并再次孵育 1 H。因為熒光標(biāo)記的抗體暴露在光線下會褪色,此步驟和所有后續(xù)步驟應(yīng)在黃燈下進(jìn)行。將載玻片在加 0.1% Tween 20 的緩沖液中沖洗兩次,并在抗褪色溶液中用 4'6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) (2 ug/ml) 復(fù)染。

對于淋巴細(xì)胞微核測試,對 1000 個雙核淋巴細(xì)胞(那些經(jīng)歷了一次有絲分裂分裂的細(xì)胞)進(jìn)行檢測,每個重復(fù)培養(yǎng)物中的 500 個細(xì)胞,用于計算微核的數(shù)量。通過切換到熒光濾光片來確定動粒點的存在與否。

檢測標(biāo)準(zhǔn)如下:
1) 細(xì)胞應(yīng)具有完整的細(xì)胞質(zhì)的圓形或橢圓形外觀
2) 細(xì)胞核應(yīng)同樣為圓形或橢圓形,具有完整的核膜
3) 只有經(jīng)歷過一次核分裂的細(xì)胞才應(yīng)檢測微核的存在
4) 僅當(dāng)微核大小為主核的三分之一或以下時才應(yīng)計數(shù)
5) 微核的染色應(yīng)與主核相似
6) 微核應(yīng)與主核明顯分開。

復(fù)制指數(shù) (RI),細(xì)胞分裂動力學(xué)的量度,通過計算每個樣本 400 個總細(xì)胞中含有 1、2、3 或更多細(xì)胞核的細(xì)胞百分比,從對微核進(jìn)行檢測的相同載玻片上進(jìn)行檢測。
復(fù)制指數(shù)RI 計算如下:
      RI = (1x% 單核細(xì)胞) + (2x% 雙核細(xì)胞) + (3x% tri) + (4x% 四核細(xì)胞)……

發(fā)布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯(lián)系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網(wǎng)友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 黔西| 莲花县| 宜丰县| 顺昌县| 南安市| 铅山县| 扶余县| 深泽县| 南木林县| 翼城县| 白银市| 通海县| 即墨市| 阜新市| 甘谷县| 浦北县| 扎赉特旗| 临潭县| 苍山县| 汉沽区| 叙永县| 嘉定区| 略阳县| 苏州市| 兴文县| 应用必备| 中山市| 屏边| 余干县| 石嘴山市| 进贤县| 大关县| 临猗县| 安乡县| 庄浪县| 长岭县| 青州市| 小金县| 和田市| 清苑县| 正镶白旗|