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MDCK細(xì)胞的生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)方法

瀏覽次數(shù):2119 發(fā)布日期:2021-7-13  來源:蘇州阿爾法生物官網(wǎng)
MDCK細(xì)胞屬于動物細(xì)胞一般采用Cytodex 作為微載體Cytodex 主要有兩個系列 即:Cytodex 和 Cytopore ,其中 Cytodex 1適合大多數(shù)的貼壁細(xì)胞。

采用Cytodex 微載體的優(yōu)勢主要有以下幾點:
1. Cytodex 微載體的表面比較適宜細(xì)胞的粘附和延展。
2. 優(yōu)化后的大小和密度對于細(xì)胞懸浮較為有利,適宜細(xì)胞的生長和高產(chǎn)。
3. 這類細(xì)胞的細(xì)胞基質(zhì)具有一定的生物惰性,可以減少攪拌培養(yǎng)過程中的剪切力損害。
4. Cytodex 微載體具有較好的可放大性。試驗證明,良好的培養(yǎng)環(huán)境下采用搏旅懸浮細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器可達(dá) 15,000 L產(chǎn)量規(guī)模,而采用貼壁細(xì)胞微載體培養(yǎng)生物反應(yīng)器可達(dá) 6,000 L 左右的規(guī)模。
 


MDCK細(xì)胞的生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)方法主要有以下幾個步驟:
一、微載體的前處理:
用pH為7.4的PBS緩沖液將Cytodex系列微載體浸泡3~24H;反復(fù)清洗后用高壓進行滅菌,冷卻。并用含牛血清的培養(yǎng)基清洗后并加入同體積的培養(yǎng)基備用。2)
二、MDCK種子細(xì)胞的解凍復(fù)蘇:
取出凍存中MDCK細(xì)胞,置于37℃-39℃的恒溫水浴振蕩器中進行解凍復(fù)蘇,再植入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進行細(xì)胞培養(yǎng)。
三、細(xì)胞的轉(zhuǎn)瓶擴培
當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞生長到90%密度時用細(xì)胞消化液處理細(xì)胞,并接入搖瓶進行分瓶培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞生長到同樣密度時,用培養(yǎng)基稀釋接入生物反應(yīng)器進行擴培。
四、生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng):
MDCK細(xì)胞接種可以依照 比例為2-25g微載體/L(培養(yǎng)基)、5-50個細(xì)胞/載體的比例接入生物反應(yīng)器中進行擴大培養(yǎng)。具體詳盡參數(shù)可以根據(jù)相關(guān)的《胞培養(yǎng)操作說明》進行設(shè)定調(diào)整。
五、病毒的感染接種:
當(dāng)生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞90%在微載體表面形成致密層后,應(yīng)當(dāng)停止攪拌,當(dāng)微載體沉淀于生物反應(yīng)器的地步是,更新培養(yǎng)基,按照TPCK胰酶1-20μg/ml、病毒感染復(fù)數(shù)0.01-1接種病毒培養(yǎng)2h后,補充培養(yǎng)基與原來的量相一致;
六、病毒收獲
當(dāng)病毒接種10H后,需要每小時取樣觀察細(xì)胞的病變效應(yīng)及CPE值,當(dāng)CPE值大達(dá)80%以上時,即可進行病毒收獲、分析測定等操作環(huán)節(jié),結(jié)合分析結(jié)果與相關(guān)《檢驗規(guī)程》執(zhí)行下一步操作。

 
【MDCK細(xì)胞生產(chǎn)疫苗流程】

 

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發(fā)布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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