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Amicon® Pro蛋白純化濃縮操作指南

瀏覽次數:4101 發布日期:2020-6-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
耗時長,產量低,
大家其實都一樣
 
蛋白從克隆表達到純化脫鹽濃縮,一路經過千山萬水,寶貴的活性蛋白產量是很多人的“命根子”。然鵝,努力的我們還是苦惱的時候多,欣喜的時候太少太少~~

 
 
純化黑科技,是時候放大招了
 
有沒有什么好方法能讓操作步驟少一點、再少一點,而同時蛋白的活性及產量損失也少一點、再少一點??
 
讓我們看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧
——Amicon® Pro

由傳統方法升級到革命性的Amicon® Pro純化超濾系統,純化、濃縮、換液從此不同。
 
真的能這樣操作??
視頻:https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html
 
讓我們一起來欣賞一下Amicon® Pro帶來的蛋白純化濃縮的流暢操作。
  
 
操作1
親和純化——多樣本操作,更快更好
6次低速離心,總耗時~100分鐘
(含65分鐘孵育時間)
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1. 在Amicon® Pro上樣池中加入200µL親和純化樹脂(根據融合標簽選擇,50%懸濁液)
和1.5mL漂洗緩沖液。1,000×g離心1min。
2. 加入0.5mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1h,其間可溫和攪動促進結合。
3. 1,000×g離心1min 以去除未結合雜質。
4. 加入1.5mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1min。
5. 上樣池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超濾管(有5種截留分子量規格可選)。
6. 加入1mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5min。
7. 4,000×g離心15min。
8. 加上蛋白樣品最終需要的緩沖液1.5mL。4,000×g離心15min,置換緩沖液的同時進行濃縮。
9. 倒轉Amicon® Ultra 0.5mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。
 
操作2
脫鹽/緩沖液置換并濃縮——
20倍體積溫和換液,效率大大提升
5次低速離心,總耗時~35分鐘
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1. 在上樣池中加入0.5mL TBS-T預濕Amicon® Pro。1,000×g離心1min。
2. 優化選做:加入1.5mL用于置換的緩沖液,1,000×g離心1min。
3. 上樣池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超濾管(有5種截留分子量規格可選)。
4. 加入1.5mL樣品,4,000×g離心15min進行濃縮。
5. 加入1.5mL需要置換的緩沖液,4,000×g離心15min,換液的同時進行濃縮。
6. 倒轉Amicon® Ultra 0.5mL超濾管,1,000×g離心回收處理好的蛋白。
 
操作
抗體標記——
操作步驟少、時間節省而抗體得率高
5次低速離心,總耗時~50分鐘
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1. 在上樣池中加入0.5mL TBS-T預濕Amicon® Pro。1,000×g離心1min。
2. 加入抗體樣品
• 對于比較稀釋的樣品(< 1mg/mL)
- 上樣池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超濾管(建議使用50kDa)。
- 加上至多1mL抗體樣品, 4,000×g離心15min。
• 對于濃度較高的的樣品( 1mg/mL)
- 在Amicon® Ultra 0.5mL超濾管(建議使用50kDa)中加入至多100µL樣品。
- 將裝有樣品的Amicon® Ultra 0.5mL超濾管接在Amicon® Pro上樣池的下端。
3. Amicon® Pro上樣池內加入預先準備好的1.5mL含有染料的反應混合液。
4. 4,000×g離心15min。
5. 優化選做:將樣品在室溫下多孵育30 min。
6. 上樣池中加入1.5mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g離心15min換液同時濃縮。
8. 倒轉Amicon® Ultra 0.5mL超濾管1,000×g離心回收標記好的抗體。
 

更多關于Amicon® Pro的靈活應用正在各個實驗室里被大家創造出來~~
歡迎告訴我們Amicon® Pro是如何幫助您提高蛋白操作效率的……
 
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Amicon® Pro 24/
(不含超濾管)
目錄號ACS500024
 
可自行搭配Amicon® Ultra-0.5mL超濾管
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發布者:默克生命科學
聯系電話:400-900-3055轉8
E-mail:3538241589@qq.com

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