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數(shù)字PCR應(yīng)用文獻(xiàn):兩種多重?cái)?shù)字PCR試劑檢測(cè)EGFR的活化和耐藥位點(diǎn)

瀏覽次數(shù):5815 發(fā)布日期:2019-5-15  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

數(shù)字PCR應(yīng)用文獻(xiàn)---

兩種多重?cái)?shù)字PCR試劑檢測(cè)EGFR的活化和耐藥位點(diǎn)


NaicaTMcrystal數(shù)字PCR
 
通常生物學(xué)樣本量有限,通過(guò)單次實(shí)驗(yàn)獲得足夠多的信息對(duì)于研究人員和診斷人員至關(guān)重要。NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了單次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)檢測(cè)和定量多重生物標(biāo)志物,并確保數(shù)據(jù)精準(zhǔn)度和可信度,通過(guò)3個(gè)不同的熒光通道,非常明確地區(qū)分靶標(biāo)位點(diǎn)。這種簡(jiǎn)單快速的技術(shù)平臺(tái)能夠兼容多種熒光染料組合,大大地?cái)U(kuò)展了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的可能性。
在NSCLC(非小細(xì)胞肺癌)治療中,EGFR(表皮生長(zhǎng)因子受體)是種常見(jiàn)的藥物作用靶點(diǎn)。EGFR活化突變位點(diǎn),如L858R,L861Q和19外顯子缺失用于預(yù)測(cè)TKIs(酪氨酸激酶抑制劑)藥物藥效,同時(shí)EGFR T790M突變用于一代TKIs藥物耐藥預(yù)測(cè)。
 
為了在不犧牲結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性的情況下,在單個(gè)測(cè)試中檢測(cè)這些突變的數(shù)量,開(kāi)發(fā)了兩個(gè)多重方法。引物和探針使用NaicaTMcrystal數(shù)字PCR系統(tǒng)三種不同熒光通道,在Panel1中可同時(shí)檢測(cè)EGFR L858R、L861Q、T790M和野生型EGFR,在Panel2中可以同時(shí)檢測(cè)19外顯子缺失、T790M和野生型EGFR。所有的assays都在400copise/ul野生型DNA 背景下,EGFR突變等位基因的頻率分別為0.25%和0.1%(如圖)

這兩個(gè)3色數(shù)字PCR檢測(cè)EGFR試劑盒檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者跟NGS比較,測(cè)得的突變等位基因EGFR片段具有較強(qiáng)的相關(guān)性。(如圖)
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