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武漢英科生物河豚毒素檢測試劑盒技術詳解 達國際一流水平

瀏覽次數:5749 發布日期:2018-4-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
武漢英科生物技術有限公司開發的河豚毒素ELISA檢測試劑盒,檢測限量達到2 ppb,在美國、日本、俄羅斯、北歐等食品企業、政府檢驗機構廣為應用,質量合格率達到100%,誤差1%左右,大量的實驗數據標明,河豚毒素檢測試劑盒技術水平國際一流水平。
 
與LC-MS儀器對比試驗,結果符合率100%,批間差異小于0.1%,試劑盒穩定高,抗干擾力強。
1.  ELISA標準工作曲線
按照競爭性ELISA操作過程,對不同稀釋度的河豚毒素標準液進行測定,以各孔平均OD值與對照組的OD值比值的logit函數為縱坐標,以不同濃度河豚毒素標準品濃度的對數為橫坐標,繪制出標準曲線。結果如圖所示:線性回歸方程為y=-1.9695x+3.3899,R²=0.9902;線性范圍為5-500 ng/mL,最低檢測限為5 ng/mL。
1  ELISA標準工作曲線(縱坐標不是抵制率logit(B/B0))
  
2.  回收率實驗
添加250 ng和500 ng的河豚毒素標準品的1 g河豚魚魚肉中,通過競爭性ELISA檢測結果如表所示:添加250 ng標準品時,回收率為159%,添加500 ng標準品時,回收率為108%。產品回收率偏高,我們分析可能是由于洗板次數太多,導致少量的抗體抗原脫離,或者是由于實驗時間偏長,抗體的效價減弱引起。產品回收率偏高,不影響檢測靈敏度,由于產品檢測限較低(5 ng/mL),所以該產品可以滿足日常對河豚魚的檢測工作要求。
2模擬樣品回收率實驗
樣品
0
250ng
500ng
河豚魚肉
ND
398ng
542.5ng
回收率%
-
159%
108%
CV%
3.7
4.3
6.2
 
3. 穩定性實驗
對濃度為10、50、100、150 ng/mL的標準品進行檢測,結果如表所示:10-150 ng/mL 4個標準品濃度變異系數為1.93-3.77%,平均變異系數為2.76%。
 
變異系數CV %=(標準偏差SD /平均值Mean)×100%
3 穩定性
添加 河豚毒素 標準品理論濃度(ng/mL)
溶液中TT含量(ng/mL)
10
50
100
150
1
15.43
60.17
124.80
167.18
2
12.38
57.51
122.02
174.24
3
13.32
54.86
113.49
152.26
4
12.55
56.80
117.83
167.03
5
15.48
57.00
111.84
157.33
6
12.49
60.14
116.74
164.63
平均
13.61
57.75
117.79
163.78
CV(%)
1.93
3.77
2.38
2.97
 
4. 樣品中河豚毒素的檢測
4  浙江與海南省河豚魚不同品種不同部位毒素分布情況         
樣品濃度X(μg/kg)
     
 
  品種
菊1#
菊2#
菊3#
菊4#
雙5#
雙6#
雙7#
雙8#
月腹刺鲀
ND
ND
ND
ND
60.56
ND
47.40
ND
293.83
ND
ND
ND
ND
1.33
30.09
0.57
ND
623.69
ND
ND
ND
ND
41.30
89.63
22.46
ND
1034.34
ND
ND
ND
ND
15.89
13.61
89.57
24.34
275.70
ND
ND
ND
ND
5.72
114.02
102.93
107.4
970.70
ND
ND
0.875
ND
5.56
43.91
52.83
ND
636.39
ND
ND
ND
ND
5.35
49.37
67.16
20.77
97.75
ND
ND
ND
ND
2.14
6.75
87.55
0.87
312.36
ND
ND
ND
ND
133.93
51.43
ND
20.73
176.74
ND
ND
ND
ND
11.57
81.78
50.19
35.67
254.21
ND
ND
ND
ND
48.30
7.57
54.78
8.25
197.55
ND
ND
ND
ND
2.56
ND
87.73
20.29
N
ND
ND
ND
ND
ND
113.30
50.89
3
46.7
ND
ND
ND
ND
ND
15.86
39.54
ND
45.75
ND
ND
ND
ND
ND
ND
20.09
20.09
59.27
性腺
ND
5.96
ND
ND
ND
ND
32.58
12.5
399.82
 
方法依據:GBT 5009.206-2007 鮮河豚魚中河豚毒素的測定
 
計算公式:X=C×D×V/m
         X:樣品中河豚毒素含量,單位為微克每千克(μg/kg)
         C:酶標板上測的河豚毒素含量,單位為納克每毫升(ng/mL)
         D:樣品稀釋倍數
         V:提取溶液的定容體積,單位為毫升(mL)
         m:檢測樣品的質量,單位為克(g)
 
關于河豚魚的毒性,一般分為4個毒力等級:毒性高于1000 MU/g為劇毒級;介于100 MU/g~1000 MU/g之間為強毒級;介于10 MU/g~100 MU/g之間為弱毒級;低于10 MU/g為無毒級(無毒級中使小鼠致死的情況可視為微毒級)。據張理對鼠單位的定義 (1 MU=0.22 μg)。
 
根據上述方法繪制標準曲線,并得出回歸方程(y=a×x-b)。其中 a、b為系數,y為抑制率(A0-A /A0%),x為Log(100*河豚毒素濃度)。根據樣品的OD490 (A)值計算抑制率,再根據公式計算出河豚毒素的濃度。結果上表所示:河豚毒素在浙江與海南省常見河豚魚的種類分布差異顯著,菊黃東方鲀未檢測出毒性,屬于無毒級別;雙斑東方鲀雖有檢測出毒性但也屬于無毒級別,其中雄性雙斑東方鲀的脾臟和胃毒力高于雌性;野生月腹刺鲀的毒力明顯高于養殖品種。
發布者:武漢英科生物技術有限公司
聯系電話:027-87745856
E-mail:info@ecalbio.com

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