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胰腺導管腺癌（PDAC）是第四大癌癥相關死因的癌癥，診斷后具有5年存活率的病人僅有3%。造成如此之差預后的原因，主要是因為局部的高復發率和對治療的多因素的抵抗。

在胰腺癌中，85%的病人診斷后處在惡性程度很高的階段，主要的特征是浸潤近端的淋巴結和血管結構，也伴隨轉移到肝和腹膜。吉西他濱作為首選藥能夠產生一些臨床效果，但是也僅能起到有限的控制病情，只有小于15%的病人在診斷后6個月中病情不在進一步惡化。盡管與其他輔助化學藥如卡培他濱、厄洛替尼等四藥聯合治療，也收效甚微。根據CONKO-001和ESPAC-3的試驗，吉西他濱在佐劑的輔助下也能增加病人的存活率。但是，最有效佐劑的化學療法尚不清楚。腫瘤切除病人的5年存活率依然徘徊在10%和20%之間。

因此，鑒定在胰腺癌中影響吉西他濱藥效的因子就變得非常重要，這不僅可以最大化治療效果，還可以避免無用的治療手段。在吉西他濱治療的病人當中，藥理學研究表明表達DNA修復酶或多肽與核苷酸轉運蛋白之間存在相關性。然而，在預后的病人當中潛伏的生物標志的基因型或表達水平非常少。

全基因組分析表明，PDAC是由于一些基因突變引起，這些基因通過核心信號通路中的一些小的序列發揮功能。這不僅可以幫助我們探索發病機制，而且提示我們藥物靶向治療的結點就在基因的表達調控之中。

最近，MicroRNA（miRNA）作為一種對基因有負面調節作用的因子對基因調控有重要作用，它主要是通過壓制或直接裂解mRNA發揮功能。MicroRNA可以控制增殖、分化和凋亡，一些microRNA基因位點的易位或缺失以及異常的表達常見于很多腫瘤中，它們可以作為腫瘤壓制基因和癌基因。此外，一些特定的microRNA可能會影響化學療法的治療。

表達譜鑒定了4種microRNA在PDAC中有異常，它們是miR-155、miR-21、miR-221、和miR-222。其中miR-21在PDAC中表達增加。miR-21與卵巢癌的發生具有相關性，它還被認為在很多實體瘤中起到中樞的作用，比如膠質瘤、膽管上皮癌、乳腺癌等。miR-21這種致癌的特性進一步的被功能性研究所支持，如果抑制miR-21的表達，可以減少很多癌細胞的增殖，如乳腺癌、肝癌和PDAC。相反，如果轉染miR-21的前體，就會刺激侵入、滲出和轉移，如神經膠質瘤、結腸癌、乳腺癌以及PDAC。

這些數據都提示miR-21可能與癌癥的進展有關，因為它是最容易檢測出的而且也是數量最多的MicroRNA之一。一些研究把它當做預后的生物標志。原位雜交的結果表明，miR-21的過表達定位于PDAC細胞中，預示著更短的存活率。但是，25位病人的大塊腫瘤組織的PCR結果顯示，miR-21與臨床病理結果并無相關性，與化學治療也無相關性。因此，我們進一步需要做的是使用激光顯微切割技術（LMD）排除間質的影響，避免樣品的污染。

最近，也有研究報道miR-21與抵抗抗癌藥物存在相關性。尤其是在膽管上皮癌和PDAC中抑制miR-21可以增加癌細胞對吉西他濱的敏感性。這篇文章主要的目的就是miR-21在PDAC各種類型組織細胞中的表達，以及與臨床結果和吉西他濱藥效之間的關系。

材料方法

選取了81位PDAC病人，制備冰凍切片，使用LMD獲取組織，精確提取5000個細胞用于提取RNA，用于后期的qPCR分析，鑒定miR-21的拷貝數。LMD還提取了5個健康人的胰腺導管。

實驗結果

從結果A中我們能夠看到，miR-21在PDAC中比在正常的胰腺導管中有非常高的表達量。激光切割的樣品較與非切割樣品表達量也提高很多，這充分說明樣品純化對于結果準確的重要性（紅色箭頭所指）。

可以看出，吉西他濱IC50的量隨著miR-21表達量更加而增加。說明miR-21會抑制吉西他濱的誘導腫瘤細胞凋亡的作用，造成很差的臨床預后。

研究結果表明miR-21與臨床治療結果以及吉西他濱的藥效具有相關性。之前研究的PCR結果并未得到這樣的數據，原因在于使用的是整塊的腫瘤組織。因為整塊的腫瘤組織是一個混雜的成分，既有間質也有導管，還具有正常的組織，造成了結果的不準確性。所以樣品的純度對于我們后期的分析結果非常的重要。

激光顯微切割技術

激光顯微切割技術是一種在細胞或亞細胞水平上，通過形態學，利用高能的激光束獲取單一細胞類型樣品的技術，該技術成功地解決了大塊分離組織中的細胞功能異質性問題，大大提高了我們分子生物學后期結果分析的準確性。

徠卡作為顯微鏡生產和研發的世家及領導者，為廣大用戶提供優質的產品。徠卡推出了兩款型號的激光顯微切割系統：LMD6和LMD7。兩款型號的區別在于所配備的激光器不同。LMD6配備固定頻率的高能激光器，主要適合常規病理切片和一些相對較薄的植物或其它組織的切片。LMD7配備了一款功率更高、頻率可調的高能固體激光器，它可以通過調節頻率來改變激光的脈沖能量來適合不同樣品。LMD7對樣品的兼容性非常好，適合各種類型的樣品包括組織切片、植物切片、涂片、活細胞等樣品。

徠卡激光顯微切割的最大特點是采用獨家專利的激光掃描式切割，重力一步法收集。掃描式切割是在切割過程中，高能激光束快速、精準的切割樣品，區別于物臺移動方式切割。重力一步法收集是最溫和和最高效的收集方式，完成切割即完成收集，提高實驗速度。

參考文獻

Elisa Giovannetti et al. MicroRNA-21 in Pancreatic Cancer: Correlation with Clinical Outcome and Pharmacologic Aspects Underlying Its Role in the Modulation of Gemcitabine Activity. Cancer Res; 70(11) June 1, 2010