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凋亡試劑盒V13241和V13245檢測步驟

瀏覽次數:6387 發布日期:2014-12-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

實驗方法

該實驗采用的是經過優化的喜樹堿誘導Jurkat細胞系凋亡實驗條件。其他類型的細胞需做相應調整。
該試劑盒在傳統及Attune™聲波聚焦流式細胞儀上驗證過,使用Attune™聲波聚焦流式細胞儀時,各種流速(25 μL/min 到 1,000 μL/min)都可以。

1.用有效方法誘導凋亡;設一不加誘導的陰性對照。

2.孵育之后收集細胞并用冷的PBS洗滌。

3.制備1×annexin V 結合緩沖液:按10次分析的量計算,加1 mL試劑C到4ml的去離子水中。

4.制備100μg/mL的PI工作液:用45μl 1×annexin V 結合緩沖液稀釋5μl試劑B,剩余可保存備用。

5.再次離心步驟2中收集的細胞,棄去上清,重懸在1×annexinV 結合緩沖液。計數并用上述緩沖液稀釋至約1 × 106 cells/mL。按每次實驗用量100μl準備充分。

6.在每100μl細胞懸液中加入5μl試劑A和1μl步驟4制備的PI工作液。

7. 室溫孵育15min。

8. 孵育結束,加400μl 1×annexin V 結合緩沖液,輕輕混勻后置于冰上。

9.盡快對染色細胞進行分析?捎肍L1檢測530nm激發光,FL3檢測>575nm的激發光。細胞群將被分為三組:活細胞顯示弱熒光,凋亡細胞顯示綠色熒光,而死細胞則同時發紅、綠熒光。

10. 可用熒光顯微鏡驗證結果,適用檢測FITC、TRITC或Texas Red®的濾光片檢測。

圖1. Jurkat細胞經10μM喜樹堿處理4h(B)或不處理(A)的流式圖。細胞經喜樹堿處理后,凋亡細胞增多。A=凋亡細胞;V=活細胞;N=壞死細胞。

閱讀原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014120004.html

發布者:杭州聯科生物技術股份有限公司
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